1. 材料与方法

1.1实验材料

豌豆（中豌2号），由周口市农科院提供。

1.2实验设计

   取优质豌豆种子，消毒12min在0.1%HgCl2溶液中,浸种一天一夜在自来水下。在20℃左右温度下催芽后，取发芽的种子腹沟朝下均匀分散的放在底部有孔、装有沙子的塑料培养盆中（每盆播30粒）。豌豆幼苗出两片叶片时，浇灌Hoagland营养液培养，培养5天后，进行如下处理。

   A、对照组（CK）：用Hoagland营养液浇灌，每天每个塑料培养盆根部浇灌20ml，同时用10mL清水喷洒豌豆幼苗叶片。

   B、渗透胁迫处理（PEG）：用含有20%聚乙二醇（PEG-6000)的Hoagland营养液浇灌根部，同时用10mL清水喷洒豌豆幼苗叶片。

   C、渗透胁迫+芸薹素内脂（0.05mg/L）处理：用含有芸薹素内脂（0.05mg/L）和20%聚乙二醇（PEG-6000)的Hoagland营养液浇灌根部，同时用10mL芸薹素内脂（0.05mg/L）喷洒豌豆幼苗叶片。

   D、渗透胁迫+芸薹素内脂（0.1mg/L）：用含有芸薹素内脂（0.1mg/L）和20%聚乙二醇（PEG-6000)的Hoagland营养液浇灌根部，同时用10mL芸薹素内脂（0.1mg/L）喷洒豌豆幼苗叶片。

   E、渗透胁迫+芸薹素内脂（0.2mg/L）：用含有芸薹素内脂（0.2mg/L）和20%聚乙二醇（PEG-6000)的Hoagland营养液浇灌根部，同时用10mL芸薹素内脂（0.2mg/L）喷洒豌豆幼苗叶片。

   F、渗透胁迫+芸薹素内脂（0.5mg/L）：用含有芸薹素内脂（0.5mg/L）和20%聚乙二醇（PEG-6000)的Hoagland营养液浇灌根部，同时用10mL芸薹素内脂（0.5mg/L）喷洒豌豆幼苗叶片。

   G、渗透胁迫+芸薹素内脂（1.0mg/L）：用含有芸薹素内脂（1.0mg/L）和20%聚乙二醇（PEG-6000)的Hoagland营养液浇灌根部，同时用10mL芸薹素内脂（1.0mg/L）喷洒豌豆幼苗叶片。

   处理6d后，取各处理样测定豌豆幼苗的株高、叶绿素含量、可溶性蛋白含量、可溶性糖含量、脯氨酸含量、过氧化氢酶活力等指标.实验重复3次，求平均值，用Excel制图。

1.3实验方法

1.3.1株高的测定

用卷尺测量幼苗高度

1.3.2游离脯氨酸（Pro）的测定

测定游离脯氨酸的含量参照刘萍等的方法[9]。剪取豌豆幼苗的叶片0.5g，剪碎，并放入试管中，加入5ml 3%的磺基水杨酸，沸水浴加热 10分钟，冷却、再用3000r/min的离心机离心10分钟。然后取上层液2mL放入试管中，加入2mL冰醋酸，2ml 3%的磺基水杨酸，再加入4mL酸性茚三酮，放入比色杯中，进行显色、萃取在520nm处进行比色，计算脯氨酸的含量。

  脯氨酸含量（μg/g）=C×V/W 。W：样品重g；C : 标准曲线查出的样品提取液浓度（μg/mL）；V：样品提取液体积ml 。

1.3.3叶绿素含量的测定

按照周天等的实验方法[6]，稍作修改。取一定数量的新鲜豌豆幼苗的叶片，称重并加入无水乙醇和丙酮各半混合提取液10ml在试管内密封提取液，等到豌豆幼苗的叶片绿色完全褪色后，提取液在分光光度计中测定吸光值，（664.0nm、647.0nm），按下式计算叶绿索含量：叶绿素的含量(mg/g) = ( 7.9A 664.5 + 17.95A647.0 ) ×10/1000W。式中：A664.5和A647.0分别为两波长下的吸光度，W为样品重。

1.3.4过氧化氢酶活力的测定

测定过氧化氢酶活力的测定参照刘萍等的实验方法[9]。具体方法：准确量取豌豆幼苗的叶片2.5g于研钵中，加4℃预冷的磷酸缓冲液(PH7.8）3mL，并加入少许石英砂研磨，将匀浆转入25mL容量瓶中，用磷酸缓冲液数次冲研钵，定容。摇匀后静置10min在4℃冰箱，取上清液离心15min，离心机设定4000r/min，取10mL的试管3支，一支试管作对照，加0.2mL煮死的粗酶液，另两支试管作处理组，加等量的未煮死的粗酶液，同时在3支试管中加1.5mL磷酸缓冲液(PH7.8）、1.0mLH2O、0.3mL的H2O2，加完立刻计时，快速倒入比色皿中，每隔1min读数1次，共4次，在240nm下测吸光值。