同时,有用的菌种保存方法是为了防范菌种退化乃至死亡的重要办法。因为不一样的微生物的拥有不一样的理化特征,对环境条件的敏感性不一样,保存方
同时,有用的菌种保存方法是为了防范菌种退化乃至死亡的重要办法。因为不一样的微生物的拥有不一样的理化特征,对环境条件的敏感性不一样,保存方式也不一样。常见的有用保存方式有冻干和冻藏保藏法。[11]
2.多粘类芽抱杆菌的基因研究
多粘类芽抱杆菌刚应用于实验研究不久,许多基因研究尚处在摸索阶段。因为适合于分析它的基因组学工具相对缺乏,最终导致对多粘类芽抱杆菌基因、蛋白分子的研究进展比较缓慢,并且很多理论研究还处于初期。但是因为近几年的发展,伴随着研究方法和理论依据的日益完善,多粘类芽孢杆菌的研究趋势有明显的增长趋势。
在基因判定、克隆及应用研究方面,多粘类芽抱杆菌E681的多粘菌素合成酶基因、CP7β-葡聚糖酶基因及吲哚-3-丙酮酸脱羧酶基因、SC2fusaricidins基因簇等都取得了相当不错的研究成果。但是,关于将其应用于fusaricidins的生物合成机制的时候,由于fusaricidins是一种非核糖体多肽合成酶体系引导合成的,由于它不是核糖体多肽合成酶系基因簇引导的,因此对该基因的克隆和表达等研究比较困难,故要是需要鉴定出fusA基因,目前就只能采取的技术就是PCR介导的定点诱变[12]。另外,在对非核糖体多肽合成酶系基因定位时发现它的相关基因位于第9个位点上,其中仅1个是定位在质粒中的,有8个基因的发现是在染色体基因组中的[13]。
具有代表性的多粘类芽孢杆菌菌株的基因序列的研究工作方面也有了相当不错的进展,E681基因组序列(登录号:CP000154)[14]、P.polymyxaSC2全基因组序列(登录号:3CP002214和CP00221)[15]、ATCC842基因组序列草图(登录号:AFOX00000000)[16]均已经被录入了GenBank中。
3.多粘类芽孢杆菌产生的代谢活性物质
多粘类芽孢杆菌的产生的代谢物具有很多可以被利用的生物活性物质。这些生物活性物质按结构可分为糖、糖蛋白、核苷酸类似物、吡嗪类等。按作用可划分为絮凝剂、抗菌多肽蛋白、植物激素和酶类等,此外有些生物活性物质还具有抗生物氧化、增强免疫等功能[17]。
3.1抗菌多肽及蛋白类
3.1.1抗菌多肽类
对于抗菌多肽与蛋白的钻研许多实验室曾经进行很久,它经过作用于微生物的细胞壁、细胞膜、克制基因表达等形式发挥它的作用,很好的克制了有害微生物的繁殖。抗菌多肽的微观结构大多数都是不一样的,有线型、线环型和环型,分子中通常有不一样的基团,如亚精胺、乙醇胺和甲酰基等。通过与抗菌蛋白的比较,发现多肽抗生素分子量比较小,其大小通常在1kD~2kD之间。因为它有很大的应用潜能,对这种物质的机制和作用的钻研还在进行,而且到现在为止,有很多成熟的产品已经出现。由于多粘类芽孢杆菌的钻研进一步的不断深入,这几年也延伸到了抗菌蛋白的提取与研究问题上,并得到广泛关注。被用作抑菌的多粘菌素就是多粘类芽孢杆菌产生的,由多种脂肪酸和氨基酸组成,由于其三维结构的不同,将其分为多粘菌素A、B、C、D、E、K、M等组分。它可以和细胞膜中脂蛋白中的结构结合,进而是细胞膜的通透性增加,导致细胞浆蛋白质等外渗的现象,最后导致细菌死亡。由于G-菌细胞壁中包含很多磷脂,因此多粘菌素对G-菌的杀菌有致死作用。其中,仅有两种毒性较低的就是多粘菌素B和多粘菌素E,它们被用于临床医学,其余都是因为毒性太大不能应用于临床。Zavascki等[18]验证表明,静脉通过注射多粘菌素B的治愈后,许多患者的病情有所好转,但对多粘菌素B的其它方面的疗效仍有待更深一步的钻研[19]。
经过研讨可知,多粘类芽孢杆菌有着非常稳定的理化性质,不但可以在相当极端的条件下存活,而且也也能生产出许多抗菌物质,使其在将来的利用中有更好的潜力。Naghmouchi等[20]从家用的饲料中得到P.polymyxaJB05-01-1。该蛋白可以抵抗酸碱性,具有很好的蛋白酶稳定性和耐热性,通过对比试验,可以发现它可以有效降低饲料中G+菌的生长和发育,延长产品保质期。