摘要：改良的CTAB法,能够高效、快速制备高质量的基因组DNA。与其它的方法相比，能够彻底避免杂质污染，得到的基因组DNA不仅浓度高而且纯度高。目前提取植物DNA大多用的是改良的CTAB法。本文以车前属植物平车前为实验材料，基于改良的CTAB法，设置了一系列的叶片质量梯度和水浴时间梯度来确定车前属植物基因组DNA的最佳条件组合。实验结果表明：当叶片质量为0.4克、水浴时间为2小时条件下提取的平车前植物基因组DNA含量较高、纯度较高。

关键词：CTAB法;车前草;基因组DNA

Optimization of Methods for Genomic DNA Extraction On Plantago depressa

Abstract: The cetyltrimethyl ammonium bromide (CTAB) method can extract genomic DNA quickly and efficiently for plant. Compared with previous methods, this method can completely avoid pollution and get a high concentration and purity of genomic DNA. Now, the CTAB method is widely used to extracting genomic DNA. In this study, based on the CTAB method, we optimized the extraction methods for  genomic DNA of Plantago depressa, including different time for 65°C incubation, and the different weight of fresh sample. Our results indicated that when the leaf’s weight was 0.4g and the incubation time was 2 hour, a high quality of genomic DNA was obtained.  

Key words:  CTAB; Plantago depressa; Genomic DNA

目录

摘要 1

引言 2

1材料和方法 3

1.1实验材料 3

1.2实验药品与试剂 3

1.3实验仪器 3

1.4实验方法和步骤 3

2结果与分析 5

2.1叶片质量对提取平车前基因组DNA结果的影响 5

2.2水浴时间对提取平车前基因组DNA结果的影响 8

3结论与讨论 9

3.1结论 9

3.2讨论 9

4展望 10

参考文献 10

致谢 12

平车前基因组DNA提取方法优化

引言

平车前属于车前属植物，又称车前草，这类植物种子中大都含有黏液、琥珀酸、腺嘌呤、胆碱等。全草中含有熊果酸、维生素B1、黄酮类等化合物[1]。平车前植物具有很多药用功效，在抗癌、抗衰老、利尿、缓泻、止咳平喘、心血管病防治、明目等[2-11]方面有很重要的作用。在我国，平车前(Plantagodepressa)植物向来被列为中药中的上品。平车前植物全草和它的种子入药,具有有利水、补肝、祛痰、清热明目的作用。同时在治疗便秘[12]、慢性气管炎、细菌性痢疾等方面也有疗效。此外，平车前植物的嫩叶可以食用，而且平车前还是定沙净水植物。但是目前平车前以及车前属中很多植物的很多功能及其功能的遗传特性还没有被人们了解和掌握。提取到高质量的基因组DNA是研究平车前以及整个车前属植物功能和遗传特性的分子基础。如今随着分子生物学技术的革新，产生了很多以PCR为基础的分子标记技术，这些技术在遗传多样性研究领域的广泛应用，有力地推动了植物遗传学方面的研究。这些技术可以让科学家们同时对多个样品进行分析，但这些技术要求提取出高质量的DNA。现在制备基因组DNA的方法有很多种，如：SDS法、异硫氰酸胍法等。它们原理基本都是使蛋白质变性，沉淀多糖，最终使DNA分离出来。但是因为操作和条件不同，它们在效率上也产生了一定的差异。科学家们经过不懈的努力，将这些方法加以完善和综合最终形成了改良的CTAB法。与之前的方法相比，能够彻底避免杂质污染，可以获得高浓度、高纯度的基因组DNA。CTAB在高离子强度的溶液中能与蛋白质和多聚糖聚合成复合物，但是不能沉淀核酸。借助有机溶剂的抽提，去除蛋白、酚、多糖类等杂质之后再加入乙醇就可以使核酸分离出来。目前提取植物DNA大多用的都是改良的CTAB法，但是在平车前植物中，基因组DNA提取方法的优化还没有报道过。因此，本文以车前草为实验材料，基于改良的CTAB法来探究提取车前草植物基因组DNA的最佳条件组合。本研究为提取高质量的平车前植物基因组DNA奠定了基础，也对研究平车前植物以及车前属植物的很多功能及其功能的遗传特性具有重要意义。