摘要：番茄基因组序列的测定已全部完成，但番茄中的丝裂原活化蛋白激酶MAPK功能尚不完全清楚。根据以前的相关研究，植物MAPK参与了植物体的抗病、抗逆和发育等生理过程，因此预测番茄MAPK也有此功能。本研究从番茄cDNA中克隆的SlMPK12作为实验材料，以该基因为模板，设计引物GY1和GY2进行PCR扩增，PCR产物纯化，以Gateway技术BP反应构建入门载体，转大肠杆菌电泳检测，选取正确克隆进行LR反应构建终载体，转化大肠杆菌电泳检测，电泳检测，保存正确的终载体克隆，为进一步的植物遗传转化做技术基础。

   关键词：番茄SlMPK12；PCR；Gateway;电泳检测

Cloning ofSlMPK12 Gene from Tomato and Construction of Plant Vector

Abstract：The tomato genome sequence determination has been fully completed, but tomato MAPK (mitogen activated protein kinase) function is not fully understood. According to previous studies, plant MAPK is involved in the physiological process of plant disease resistance, stress resistance and development. Therefore, it is predicted that MAPK also has this function. This study from tomato cDNA clone of SlMPK12 as experimental material, to the base as the template and primers were designed for PCR amplification, the PCR products were purified and gateway technology BP responses to build entry vector, Escherichia coli electrophoresis, select correct clone LR reaction to construct the final carrier, transformation of Escherichia coli electrophoresis, electrophoresis, save the right end cloning vector, for further plant genetic transformation technology base.

Key words: tomato PCR; SlMPK12; Gateway; electrophoresis detection

目    录

摘要 1

引言 1

1 材料和方法 2

1.1实验仪器和常用试剂配制 2

1.1.1实验所用抗生素 3

1. 2实验操作方法 3

1.2.1PCR 3

1.2.2产物纯化技术 4

1. 2.3质粒提取 5

1.2.2大肠杆菌热激转化 6

1.2.4凝胶电泳 6

1.2.5BP反应 6

1.2.6LR反应 7

2结果与分析 7

2.1SlMAPK12的克隆 7

2.2入门载体的构建 7

2.3终载体的构建 8

讨论与结论 8

参考文献 9

致谢 11

番茄SlMPK12基因的克隆及植物转化载体的构建

引言

番茄又叫西红柿，一年生或多年生的草本植物，双子叶植物纲茄科番茄属，番茄的株高一般在0.7-1.0米或1.0-1.3米范围内不等，植株生粘质腺毛，具有强烈的气味，叶羽状复叶或羽状深裂，花一般3-7朵，花冠、花萼均呈辐状，果实颜色桔黄色或鲜红色，形状呈扁球状或近球状，肉质多汁液，夏秋季开花结果，种子黄色呈扁平短卵形，根系发达，再生能力强。

番茄原产南美洲的秘鲁和墨西哥，最初作为一种观赏植物由南美引入欧洲，到了十八世纪中叶开始作为食用栽培，而后传入我国，我国的番茄栽培到从开始到现在约有百年的历史。现在在我国、欧洲、美洲、日本等国家和地区均有大面积的温室栽培以及其他方式的栽培，而且范围还在继续扩大，番茄现在已经成为全球栽培最为广泛的蔬果之一[1]。

番茄既是美味蔬果，又是一种良药。番茄浆果含有多种对人类有益的营养物质，有较多的叶酸、苹果酸、柠檬酸等有机酸，烟酸（维生素B3)的含量更在果蔬中位居前列，这种维生素是合成性激素不可或缺的成分，也是组成人体脱氢酶的辅酶的必须成分，此外烟酸还参与了人的机体的氧化还原过程，并参与维持大脑和神经的正常机能[2]。现代医学的研究表明，人体内维生素C的量，直接影响到人类的抗癌能力，因此人们尤其是癌症患者需要适量的补充维生素C，因此，番茄成为人们防癌抗癌的首选蔬果。此外，番茄的胡萝卜素可以保护人体皮肤的弹性，番茄红素可以保护细胞DNA免受自由基损害，防止细胞病变、突变、癌变，番茄还具有很强的抗氧化能力，保护细胞[3-5]，因此番茄有一定的护肤作用。