番茄作为一种对人类十分重要的蔬果，对于番茄基因的相关研究也就十分重要。了解番茄基因组可以帮助人们改进番茄质量，也可以利用番茄相关基因对番茄以及其他作物的产量、营养、抗病性、风味和颜色产生影响。MAPK是信号传导中的重要组成部分，以前的相关研究表明，一些植物MAPK基因会对植物的抗病、抗逆和细胞分化等生理过程会产生重要影响。而番茄MAPK功能尚未完全清楚，此次研究以番茄SlMPK12基因作为模板，设计适用于Gateway技术的引物GY1和GY2进行PCR[6-7]扩增，通过Gateway[8-9]技术将纯化后的番茄SlMPK12基因的PCR产物和供体pDONR207进行BP反应构建入门载体，然后大肠杆菌热激化法[10-12]转化大肠杆菌进行菌液PCR电泳检测和质粒凝胶电泳[13-14]检测，选取正确入门载体克隆和35ss-GW-3xHA供体进行LR反应构建终载体，为进一步植物转化研究番茄SlMPK12的功能做基础。

1 材料和方法

1.1 实验仪器和常用试剂配制

本实验所用仪器及试剂，番茄SlMPK12基因序列,大肠杆菌DH5α均由周口师范学院生命科学与农学学院植物遗传与分子育种重点实验室提供。

实验仪器：PCR扩增仪、冰箱、高压灭菌锅、离心机、精密电子天平、移液枪、烘箱、电泳槽、恒温水浴、37℃恒温摇床、37℃培养箱、超净工作台、电泳仪、蛋白胶制备系统等。

   实验试剂：dd溶胶液、琼脂糖、庆大霉素、pDONR207、35ss-GW-3xHA、BP酶、LR酶、TAE缓冲液、WB漂洗液、Loading Buffer、2×Maker、2×MixTaq酶、固体LB培养基、液体LB培养基、蒸馏水等。