番茄基因SlMPK1的克隆及植物转化载体的构建(2)

拟南芥是一种模式生物,其形态个体很小,高度仅30㎝左右,形态特征简单;生长周期很快,播种6周左右就可以收仔,且其种子数量很多;基因组小,一般


拟南芥是一种模式生物,其形态个体很小,高度仅30㎝左右,形态特征简单;生长周期很快,播种6周左右就可以收仔,且其种子数量很多;基因组小,一般仅有5对染色体。基于拟南芥的这些特点,它被很广泛的应用于遗传学,分子生物学和生态学等学科的大量研究中。但目前来说,拟南芥在分子生物学研究方面的应用最为集中,主要用于研究基因的克隆分析,载体转化,基因的表达与调控等[8]。

本研究期望通过对番茄基因SlMPK1序列进行分析,克隆目的基因,利用Gateway技术获得35ss-MPK1-3HA双元植物表达载体。最后,利用以农杆菌为介导的方法将其成功导入高等植物拟南芥中,观察它的表型,从而研究基因的功能。

1.材料和方法

1.1实验材料

1.1.1感受态细胞

感受态细胞:大肠杆菌DH5α,/农杆菌Gv3101

1.1.2生化试剂和酶

1.1.2.1酶

KAPA-HiFi  DNA高保真酶

2×PCRmix酶含loading buffer

1.1.2.2生化试剂和抗生素

Gentamycin (庆大霉素)

Rifampicin(利福平)

Spectinomycin (壮观霉素)

无水乙醇、TAE缓冲液、甘油、LB培养基、高纯度质粒、试剂盒、蒸馏水、琼脂糖等。