摘要：宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤，特定型别的HPV（人乳头瘤病毒）感染是引发宫颈癌的主要因素，特别是HPV59型。本实验用UV法检测，SDS-PAGE凝胶电泳，常规ELISA等方法对北京义翘神州生物技术有限公司提供的HPV59型兔单克隆抗体进行了浓度、细胞活性、稳定性，特异性及鉴别能力的检测。HPV59型兔单克隆抗体的浓度比较高、细胞活性很好、很稳定，具有特异性。对HPV59中和抗体的质量进行了评价，通过检测人类乳头瘤病毒HPV59中和抗体质量合格，可以放行。

关键词：HPV59；兔抗体；ELISA检测；中和抗体

The Research and Prospect of Quality Evaluation of the Human Papillomavirus HPV59 Neutralizing Antibody

Abstract:The cervical cancer is a common malignant tumor in gynecology. The specific type of HPV (human papilloma virus) infection is a major cause of cervical cancer, especially the HPV59 type. Concentration, cell activity, stability, specificity and identification ability of Type HPV59 rabbit monoclonal antibody were detected by the method of UV assay, SDS-PAGE gel electrophoresis, conventional ELISA. The results showed that HPV59 type rabbit monoclonal antibody concentration is high, the cell activity is very good and stable, with specificity. The quality of neutralizing antibody against HPV59 was evaluated, and the quality of neutralizing antibody against human papilloma virus HPV59 was detected.

Key words: HPV59; Rabbit Antibody; ELISA Test; Neutralizing Antibody

目录

摘要 3

引言 4

1.实验材料及方法 5

1.1实验材料及仪器 5

1.1.1实验材料 5

1.1.2实验试剂及药品 5

1.1.3实验仪器 5

2.实验方法 6

2.1HPV59抗体含量UV检测 6

2.2HPV59抗体SDS-PAGE凝胶电泳检测 6

2.2.1制胶 6

2.2.2HPV抗体样品准备 7

2.2.3垂直电泳 7

2.2.4考马斯亮兰染色 7

2.2.5凝胶扫描和保存 7

2.2.6试验数据处理 7

2.3HPV59中和抗体检测 7

2.4HPV59抗体产品纯度的测定 9

2.5HPV59-R023产品特异性检测 12

2.6HPV59的鉴别检测 13

2.7HPV59的稳定性检测 13

3.实验结果 14

4.讨论与结论 19

5.展望 20

参考文献 21

致谢 23

人类乳头瘤病毒HPV59中和抗体的质量评价研究及展望

引言

宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤,特定型别的HPV（人乳头瘤病毒）感染是引发宫颈癌的主要因素[1]。人类乳头瘤病毒，属乳头多瘤空泡病毒科乳头瘤病毒属。目前已发现约有余种亚型，可分低危型和高危型两大类。低危型HPV（6、11、30、39、42、43、44型等）主要引起皮肤和肛门外生殖器粘膜良性疣状增生性病变。高危型HPV（16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58型）则引起宫颈癌、外阴癌、口腔癌等恶性肿瘤[2]。人类皮肤角质形成细胞及黏膜鳞状上皮细胞根据HPV致癌性的不同可分为高危型，低危型。PV（乳头瘤病毒）是一类在自然界中广泛存在的嗜上皮性病毒群，对于PV的分类一直是近几十年来争论的焦点。对于HPV型，指的是一个完整的基因型，目前为止，HPV基因组DNA序列是利用PCR技术，并非传统的克隆技术获得。HPV是最为常见的女性生殖道感染的病原体,主要通过性传染途径感染(sexuallytransmittedinfection,STI)，也可因直接、间接接触污染的内裤、浴盆、浴巾、便盆等物品或少见的主动接种途径感染人类。75%性活跃期人群在其一生中均会感染HPV并可能发展成为HPV相关疾病。HPV感染机理是其基因组可以整合到宿主细胞的染色体上。早期基因及其表达产物在用于研究病毒持续感染和致癌机制，但她具有感染的高度嗜上皮性和严格的种属特异性所以很难用于体外培养和感染模型建立，限制了对其致病机制的研究[3]。研究表明，HPV能引发不同类型的人类癌症，且不同的HPV类型引发的部位与能力均有差异[4]。HPV可以和正常的细胞染色体整合，感染HPV后，有可能会出现恶性转化。传统的HPV检测方法，主要通过免疫学方法测患者血清中的抗原或抗体，不过只有大约50%的患者会产生相应抗体，并且阴性感染者也检测不到相应的抗原[5]。不仅如此，HPV无法再体外培养，所以一般检测需要对HPVDNA分子序列进行检测。本实验运用UV法，SDS-PAGE凝胶电泳及SEC-HPLC，中和活性检测，特异性和鉴别检测，IVRP(ELISA)检测，测定了其浓度了、细胞活性、稳定性，特异性及鉴别能力。从而对HPV59中和抗体的质量进行评价。