摘  要：优化白花蛇舌草总黄酮（FOD）分离提取工艺,采用超声波破碎分离协同双水相分离纯化FOD，实验方法以单因素实验为基础，依据Box-Behnken实验设计原理进行组合试验，选择硫酸铵质量分数、乙醇质量分数、pH为影响因子，将FOD萃取率当作响应值进行分析。结果表明双水相体系最优参数组成为28.5%乙醇-21.4%（NH4)2SO4，pH为3.79，温度为23℃，4%NaCl，将最优参数取整后实验三次得到FOD平均萃取率为88.5%。与响应面优化FOD萃取率推测值89.58%接近，对FOD的研发应用提供参考。

关键词：白花蛇舌草；总黄酮；提取；响应面；双水相

Study on Extraction Technology of Total Flavonoids from Oldenlandia Diffusa

Abstract: Optimization of Oldenlandia Diffusa total flavonoids (FOD) separation and extraction technology. Using ultrasonic crushing separation synergistic aqueous two-phase separation and purification FOD, experimental methods based on single factor experiments, according to Box-Behnken experimental design principle combined experiment, the mass fraction of ammonium sulfate, mass fraction of ethanol, pH factor to influence the FOD extraction rate as a response value analysis. The results showed that the optimal parameters aqueous two-phase composed of 28.5% ethanol -21.4% (NH4) 2SO4, pH was 3.79 and a temperature of 23 ℃, 4% NaCl, After rounding the optimal parameters, Then three experiments obtained FOD average extraction rate of 88.5%. The experimental results were closed to the response surface optimization FOD extraction rate estimated value of 89.58%. In this paper, the research results could provide reference for the research，development and application of FOD.

Key words: Oldenlandia Diffusa; Total flavonoids; Extraction; Response surface methodology; Aqueous two-phase system

目    录

摘  要 1

引言 1

1. 材料与方法 2

1.1实验材料与仪器 2

1.2实验方法 3

1.2.1 FOD粗提液的制备 3

1.2.2 FOD含量测定 3

1.2.3 乙醇-硫酸铵双水相萃取方法 3

1.2.4 探究影响FOD萃取的因素作用 3

2 实验结果与分析 4

2.1 单因素实验 4

2.1.1 乙醇质量分数对FOD分相萃取的影响 4

2.1.2 (NH4)2SO4质量分数对FOD萃取效果的影响 5

2.1.3 pH值对FOD萃取的影响 5

2.1.4 NaCl质量分数对FOD分配行为影响 6

2.1.5 温度对FOD萃取效果影响 7

2.2 主要因素的选取 8

2.3 响应面法优化FOD提取试验设计与分析 8

2.3.1 实验设计结果 8

2.3.2 回归模拟方程有效性检验与单因素显著性确定 9

2.3.3 FOD提取得率响应面分析与优化 9

2.3.4 响应面得出的FOD最优条件验证 11

3 结论与讨论 12

参考文献 12

致谢 14

白花蛇舌草总黄酮的提取工艺研究

引言

白花蛇舌草是一种重要的中药材，别称蛇舌草、蛇脷草、珠仔草等，其为茜草科耳草属植物，喜好温湿环境，不耐寒。其主要分布在中国南方、日本。主要含有甾醇类化合物、蒽醌类化合物、有机酸、萜类化合物、黄酮和黄酮醇苷类化合物、微量元素、多糖类、少量生物碱等成分[1-3]。具备清热散瘀、利尿排湿、抗炎免疫、镇痛等奇效。药理研究证实黄酮类物质抗肿瘤效果明显，可以加强免疫功能、干扰能量代谢、诱导癌细胞死亡、阻碍瘤血管形成等[4]。

本文主要探究白花蛇舌草总黄酮的最优纯化方法，传统提取FOD方法有：溶剂提取法、回流提取法，现代新技术包括超声波提取法、微波提取、超临界流体萃取、酶解法等[5]。因为传统的分离工艺粗糙，热量流失大，纯化率低。而采取超声破碎分离，更容易破坏白花蛇舌草组织细胞，便于FOD的溶出。双水相系统较传统水-有机溶剂界面应力较小，对萃取分子破坏小。双水相优点：物质互容性高、萃取环境适合、含水量高、分相节时、有毒物质少、便于扩大和实验操作[6]。所以本实验采取超声波破碎协同双水相分离纯化FOD，用于指导实际生产应用。