1. 材料与方法 1.1实验材料与仪器 白花蛇舌草,买于周口市同和堂大药房; 芦丁标准品,国药集团化学制剂有限责任公司; 乙醇,石油醚,硝酸铝,氢氧
1. 材料与方法
1.1实验材料与仪器
白花蛇舌草,买于周口市同和堂大药房;
芦丁标准品,国药集团化学制剂有限责任公司;
乙醇,石油醚,硝酸铝,氢氧化钠,亚硝酸钠,氯化钠,硫酸铵,盐酸均为国产分析纯。
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1.2实验方法
1.2.1 FOD粗提液的制备
称取20g已经粉碎的白花蛇舌草,加入一定量石油醚浸泡2小时脱脂。将混合液抽滤过后把滤渣平铺于通风处,使剩余石油醚挥发直至白花蛇舌草干燥。按料液比1:20(g/mL)加入到70%乙醇中,搅拌均匀后置于40℃水浴锅里加热30分钟。500W超声45min,超声2s,停1s,超声警戒温度为60℃,过滤[7]。滤后把滤渣重复超声三次,收集几次滤液得到FOD粗提液,测出FOD含量。
1.2.2 FOD含量测定
以芦丁为标准品,用硝酸铝络合体系构建的分光光度法测定FOD,吸光度选择在510nm处,纵坐标为所测得吸光值 ,芦丁的浓度(mg/mL)为横坐标制作标准曲线[8]。其标准曲线方程为: 。由此方程算出来FOD的浓度为A(mg/mL)。即FOD提取率为:(1)
式中,F为提取率(%),粗提取液总体积为V总(mL),M为加入白花蛇舌草粉末质量(g)。
1.2.3 乙醇-硫酸铵双水相萃取方法
室温下量取一定量乙醇、(NH4)2SO4、白花蛇舌草总黄酮粗提取液放于小烧杯中,确定双水相总容量为45mL,混匀后,调节pH,倒入分液漏斗。当上下相分层明显且不变时,测出各层体积和吸光度。上相中的FOD浓度较大。