摘要：FtsH基因家族是一种广泛存在于原核和真核生物中的ATP依赖型金属蛋白酶。本文以拟南芥的FtsH基因为检索序列，利用BLASTP程序对高粱的基因组进行扫描，得到在高粱基因组中的10个FtsH基因。序列表达分析，Sobic.003G195000和Sobic.009G256500序列是一对片段重复序列，Sobic.009G256500序列表现为特异型表达，而Sobic.003G195000序列则表现为组成型表达。基因的结构与保守基序特征分析，FtsH基因家族的结构可分为七类，保守蛋白包括三种保守基序。系统进化分析，10个FtsH蛋白成员可分为6个类群，其中Sobic.003G195000和Sobic.009G256500序列是一对特异同源序列。组织表达谱分析，在46个高粱器官组织或处理条件下Sobic.003G195000序列的FPKM范围为2.43~4.91，Sobic.009G256500序列的FPKM范围为-10~-5.03，Sobic.009G256500序列在表达上发生了分化，表现为表达上的多样化。从基因结构和保守蛋白两方面分析，Sobic.003G195000序列和Sobic.009G256500序列的基因发生的突变低。本研究为进一步探明高粱FtsH 基因家族成员的生物学功能提供理论指导。

关键词：高粱；SbFtsH基因；进化分析

Molecular Cloning, Expression and Evolution of SbFtsH Genes in Sorghum

Abstract: FtsH gene family is a kind of ATP dependent metalloproteinase, which is widely existed in the prokaryotic and eukaryotic organisms. In this paper, the sorghum genome was scanned using Arabidopsis FtsH gene sequences as queries, and using the blastp program. A total of 10 FtsH genes were identified in the genome of sorghum. Sequence and expression analysis showed that Sobic.003G195000 and Sobic.009G256500 is segmentally duplicated, and that Sobic.009G256500 and Sobic.003G195000 was constitutively expressed. Analysis of gene structure and conserved motifs, the structure of the FtsH gene family can be pided into seven categories, including three conserved protein motifs. Phylogenetic analysis, 10 FtsH protein members can be pided into 6 groups, including Sobic.003G195000 and Sobic.009G256500 sequence is a pair of specific homologous sequences. Tissue expression profile analysis, the Sobic.003G195000 sequences of 46 sorghum organs or processing conditions in the FPKM range of 2.43~4.91, the Sobic.009G256500 sequence of the FPKM range of -10~-5.03, Sobic.009G256500 had the differentiation in sequence the expression, for the performance of the persification on expression. Analysis from two aspects of gene structure and conserved protein, Sobic.003G19 The gene mutation of the 5000 sequences and Sobic.009G256500 sequences was low. This study provides theoretical guidance for the further study of the biological function of the members of the FtsH gene family in sorghum.

Key words: Sorghum; SbFtsH Gene; Phylogenetic analysis

目    录

摘要 1

关键词 1

引言 2

1 材料与方法 3

1.1试验材料 3

1.2序列检索与下载 3

1.3特异引物设计与基因片段克隆 3

1.4高粱FtsH基因家族的生物信息学分析 4

1.5高粱FtsH基因的表达分析 4

1.6高粱及其它植物FtsH基因的进化分析 4

2 结果与分析 5

2.1高粱FtsH基因的生物信息学鉴定 5

2.2高粱FtsH基因部分序列的克隆、测序与表达 5

2.5高粱FtsH基因的组织表达谱 8

2.6高粱及其它植物FtsH基因的系统进化关系 11

3 讨论与结论 13

参考文献 14

附录 16

致谢 17

高粱SbFtsH基因的分子克隆、表达及进化研究

引言

蛋白水解在植物生物学研究中是一个重要的领域，但至今这个领域的研究仍然比较缓慢。蛋白酶在许多重要的生物学过程中扮演着水解蛋白的功能，主要参与细胞凋亡、衰老、相应外界环境的变化等[1-3]。就底物特异性和生理生化功能而言，这些蛋白酶的相关信息仍然不为人知，FtsH是一种依赖于ATP的金属蛋白酶，它普遍存在于原核和真核物种中[4-7]。FtsH基因首次在大肠杆菌突变体中被描述，具有温度敏感和细胞分裂缺陷的特征，同时在lamda噬菌体中也被称之为Hf1B基因[8-9]。早期研究显示，FtsH基因在细菌、酵母、植物和人类中成员数目不尽相同，几乎所有植物FtsH同源蛋白均被核基因编码[10]。原核生物FtsH蛋白通常与质膜相结合，真核生物FtsH蛋白往往定位于叶绿体和线粒体膜上。FtsH蛋白N端具有alpha螺旋结构，这种螺旋可以将FtsH蛋白定位在线粒体或类囊体的膜上。在FtsH蛋白的疏水结构域后边存在着ATPase结构域，这个ATPase结构域是AAA蛋白超家族的典型特征。蛋白水解结构域位于C末端，这个结构域还包括一个Zn结合模体。蛋白结构晶体分析显示，FtsH蛋白形成了一个环形的六聚体，而ATP结合模体正好朝向环形中心位置。由于大多数FtsH基因突变体的表型性状并不明显，因此，FtsH基因的功能很难被鉴定。迄今为止，在拟南芥中，AtFtsH1、AtFtsH2、AtFtsH5和AtFtsH8基因均可编码叶绿体蛋白，这些FtsH蛋白主要参与复合物形成、II光系统修复和叶绿体器官建成等重要过程[11-13]。