1材料与方法

1.1实验材料

实验所用的材料拟南芥由西北农林科技大学生命科学院细胞生物学实验室提供，分别是野生型（WT）、突变体型（A2和A4）和超表达型（OE-37-4、OE-26-2-2、OE-26-6-3、OE-26-6-7）三种类型、七个株系。超表达型即转基因型：拟南芥中转入了Ta-Rboh基因；突变体型：拟南芥中敲除了与Ta-Rboh基因序列相似的同源序列。

1.2实验设计

种植：将选好的拟南芥种子置于1.5 ml离心管中，用1 ml 70% 的酒精冲洗一次（注意震荡），放置4 min后，用无菌水冲洗（冲击震荡）3-4次，再加1 ml次氯酸钠（NaClO）（NaClO浓度为2% ，由8%的次氯酸钠 ：无菌水=1:3配成）放置10 min ,然后用无菌水冲洗5-6次，使干净的种子与水的体积比为1:1。接着开始点种到培养基上，把培养基放入4 ℃冰箱春化三天，然后置于22 ℃培养箱，约1周待拟南芥长出4-5叶后转土培。土培时，挑选长势较好的拟南芥幼苗进行移栽。每个株系种植6盆，每盆栽种5株拟南芥。土培的全过程都在22 ℃光照培养箱中，光周期为16 h光照，8 h黑暗。土培期间给拟南芥浇灌水和1/2 MS营养液，保持土壤湿润，使植株长势良好。

胁迫处理：土培一个月后，对拟南芥进行实验处理。每一株系中分别3盆停止浇水，另外3盆正常浇水进行对照。胁迫期间，每天同一时间进行处理，浇水量相同，一天处理一次。连续胁迫5天后恢复浇水，测定一下相关生理指标，包括保护酶系统中SOD、CAT和POD的活性，脯氨酸（Pro）和丙二醛（MDA）的含量。测量时，每个指标测3次取其平均值，记录数据。

1.3实验方法和测定指标

（1）拟南芥中游离脯氨酸（Pro）含量[4] 用酸性茚三酮法测定。

（2）拟南芥中丙二醛（MDA）含量[4] 用硫代巴比妥酸法测定。

（3）拟南芥中超氧化物歧化酶（SOD）活性[5] 用氮蓝四唑（NBT）还原法测定。

（4）拟南芥中过氧化氢酶（CAT）活性[6] 用高锰酸钾滴定法测定。

（5）拟南芥中过氧化物酶（POD）活性[6] 用创伤木酚比色法测定。