1实验材料与方法

1.1实验材料

1.1.1供试植物

拟南芥种子，由西北农林科技大学生命科学院细胞实验室提供。分别是野生型（WT）、突变体型（A2和A4）和超表达型（OE-26-6-3、OE-26-6-7）三种类型、五个株系。

1.1.2MS培养基

大量元素储备液、微量元素储备液、铁盐、有机元素储备液。本实验还使用蔗糖和琼脂，用以上储备液按需求配制完全营养液并调整PH值为7.8。

1.1.3固体培养基材料

有机土，蛭石

1.1.4实验器材

立式压力蒸汽灭菌锅、光照培养箱、PH酸度计、电子天平、洁净工作台、移液枪、分光光度仪，低温高速离心机。

1.2方法

1.2.1MS培养基的制备

将上述MS培养基的大量元素，微量元素，铁盐，蔗糖按照比例混合后定容于容量瓶中。将定容后的混合液体到入大烧杯中，用混合指示剂调节PH值为7.8，加入琼脂，再分装入三角瓶中并封口。将培养皿、移液枪的枪头，以及纯水一起放入自动灭菌锅内120℃灭菌20min。

1.2.2倒平板

将灭菌后的溶液在无菌操作台中倒入培养皿中，所倒入溶液约占培养皿高度的l／3，再将上盖盖好，冷却待用。

1.2.3拟南芥培育

(1)选好的种子置1.5ml离心管，用70%酒精1ml冲洗一次，放置4分钟

(2)用无菌水冲洗3-4次

(3)加入1ml次氯酸钠，放置10分钟

(4)1ml无菌水冲洗5-6次

(5)离心弃水，重新加入适量无菌蒸馏水将种子悬浮，分散打到MS盐培养基上，

(6)封口置于4℃冰箱春化3d

(7)在26℃、8h光照，16h黑暗、空气湿度70%-80%条件下的光照培养箱中培养，待幼苗长到四片叶子后，移至营养土培养

(8)将苗移到光照培养箱中培养，定期浇水和营养液，保持土壤湿润，培养3周

1.2.4胁迫处理

野生型、突变型、超表达型的幼苗各6盆，3盆为对照，另外3盆进行胁迫处理。此实验前进行预实验找到了合适的铅浓度，定期将高浓度的铅离子溶液倒入胁迫组的托盘里，处理四天。