本实验采用双水相法分离提纯白藜芦醇[6]，并且通过一系列单因素试验考察丙酮浓度、硫酸铵浓度、pH、温度四个因素对白藜芦醇粗提取液中的白藜芦醇萃取率的影响[7]。在确定合适提取条件的基础上，通过响应面试验设计进一步对粗提取液中白藜芦醇分离工艺条件进行优化，最终确定白藜芦醇提取条件的最佳组合、关键因素及其交互作用，以期能提高白藜芦醇的萃取率，为白藜芦醇工艺研究的进行提供较好的支撑[8]。

1.材料与方法

1.1实验材料与仪器

虎杖，于周口市同和堂药店购买；

白藜芦醇标准品购于上海金穗生物科技有限公司；

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另外无水乙醇、丙酮、硫酸铵、盐酸、氢氧化钠、pH试纸、滤纸、烧杯、量筒、玻璃棒、分液漏斗、铁架台、温度计、擦镜纸、比色皿、锥形瓶、容量瓶、试剂瓶等，以上均为周口师范学院生命科学与农学学院实验室提供。

1.2实验方法

1.2.1配制标准品溶液

准确称取白藜芦醇标准品1.6mg，将标准品用70%的乙醇定容于100mL容量瓶中，摇匀即得到浓度为0.016mg/mL的标准品对照液[5]。

1.2.2检测最适波长

取白藜芦醇标准对照液，以乙醇为参比，在250-500nm波长之间每隔3分钟对其进行一次光谱扫描。光谱扫描显示的结果是：标准对照液在306-308之间出现最大吸收，标准品对照液在306nm波长处有最大吸收，由此确定检测的最适波长为306nm。

1.2.3白藜芦醇标准曲线[9]

以浓度C作为横坐标，吸光A作为纵坐标，绘制标准曲线，结果如图1，得到的标准曲线方程为：Y=0.1071X-0.0316（R2=0.994）

白藜芦醇标准曲线

1.2.4原材料处理

选取干燥无霉变的虎杖，置于粉碎机中，在1500r/min的转速下粉碎2min，使其为粉末状，粉粹后再过筛，取出置于广口瓶中备用。准确称量20g虎杖粉末，采用超声波辅助有机溶剂提取虎杖中的白藜芦醇，设定为温度48℃、液料比1：20、乙醇浓度70%、超声处理时间为50min[10]。将超声波提取后的溶液用循环水真空泵过滤，弃掉滤渣，得到的滤液即为白藜芦醇粗提取液。

2.实验结果分析

2.1单因素分析

2.1.1不同浓度丙酮对白藜芦醇萃取率的影响

在硫酸铵浓度为22%、pH为6、温度40℃的条件下，可以得到不同丙酮浓度中双水相所对应的吸光度，由公式R=V上/V下，K=C上/C下，Y萃取率=[Rk/(Rk+1)]×100%计算出双水相对白藜芦醇的萃取率[11]。由分析得在丙酮浓度40%-80%范围内，白藜芦醇的萃取率随着丙酮浓度的增大先增大而后逐渐减小，并在丙酮浓度为60%时，萃取率最大。