2.3参考其他文献应得出的结果 7

2.3.1形态观察..7

2.3.2革兰氏染色 7

2.3.3生理生化鉴定 7

2.4实验过程中的图片.7

3结论与讨论.9

参考文献 10

致谢 11

草酸钙分解菌的分离与鉴定

引言：草酸钙分解菌是降解草酸钙结石的微生物中的重要一类，同时也是降解结石微生物的优势菌群，其对草酸钙的独特降解作用在预防结石和治疗草酸钙结石方面起重要作用[1]。草酸钙分解菌，顾名思义是一种以草酸钙作为碳源而生长的一种分解菌，此菌能够在以草酸钙为唯一碳源的培养基上生长，并且因其能够分解菌落周围的草酸钙故而会在培养基上出现不含草酸钙的透明圈。而这些透明圈的大小可以反映出此分解菌降解草酸钙能力的大小。近年研究表明，在动物及人的肠道中存在一些菌能够分解草酸钙，以及有国外的研究表明在土壤中也可以分离得到草酸钙分解菌，但目前国内在土壤中分离得到此菌的研究并不是很多见。本文就以周口公园土壤为试材，从土壤中筛选出草酸钙分解菌，通过对其外表形态、各种生化特性以及基因序列的分析从而将其鉴定分类。本研究对认识土壤中草酸钙分解菌的功能特性、生化应用等有一定应用价值。

1.材料与方法

1.1实验材料

1.1.1实验试材

土样（采自于周口公园中位于地下1-20cm处的混合土样,并且在土壤上有过粪便）

1.1.2主要培养基

LB培养基：酵母粉5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，琼脂13g，0.1%草酸钙；

SchlegelAB+草酸钙培养基：在培养皿中包含两层固体，上层（约5毫升）加入相同的溶液但是添加了草酸钙作为碳源，下层（约20毫升）为A和B混合液且没有的碳源的加入。A溶液的组成（每升蒸馏水）为：9克的Na2HPO4·12h2O；1.5克的KH2PO4；1g的NH4Cl；和0.2克的MgSO4·7H2O，再加入一毫升的微量元素溶液DSM27。并调节溶液的最终PH值为7.2。B溶液的成分（在250毫升蒸馏水）：0.125g的Fe（NH4）-柠檬酸、0.250g的CaCl2·H2O再加入1.6%的琼脂制备成固体培养基。灭菌后（1Pa，120°C，20分钟），A、B两液按100:1比例混合。

葡萄糖蛋白胨液体培养基：蛋白胨5g，葡萄糖5g，磷酸氢二钾2g，蒸馏水1000ml.

柠檬酸盐培养基：磷酸二氢铵1g,氯化钠5g，磷酸氢二钾1g，硫酸镁0.2g，柠檬酸钠2g，琼脂13g，1%溴麝香草酚蓝指示剂10ml，蒸馏水1000ml.

糖发酵培养基：蛋白胨水培养基1000ml，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1-2ml，pH7.6，另配20%糖溶液各10ml.

以上所有培养基灭菌条件：121℃，0.1MPa，30min。

1.1.3试剂

（1）结晶紫染色液：A液：2g结晶紫溶解于20ml的95%乙醇中；B液：0.8g草酸铵溶解于80ml的蒸馏水中；混合A、B液，然后静置48小时后使用。

（2）95%的乙醇：

（3）碘液：称取碘化钾4.4g，加少量蒸馏水溶解，加入碘2.2g，溶解后定容至100mL，贮于棕色瓶中。

（4）番红复染液：2.5g番红溶解于100ml95%的乙醇中，再与蒸馏水以1:8的比例混合均匀后使用。

（5）1%溴麝香草酚蓝指示剂：6.4ml0.01mol/LNaOH，1g溴麝香草酚蓝，蒸馏水93.6ml.

（6）甲基红指示剂：现将甲基红溶于95%乙醇中，然后加入蒸馏水即可。变色范围pH4.2-6.3，颜色由红变黄。