本研究以公主白茄为材料,在茄科基因组网站(Sol Genomics Network)中,以拟南芥和番茄的Pht1基因为搜索条件,系统分析了Pht1家族的31个基因,通过实时定量
本研究以公主白茄为材料,在茄科基因组网站(Sol Genomics Network)中,以拟南芥和番茄的Pht1基因为搜索条件,系统分析了Pht1家族的31个基因,通过实时定量PCR对这31个基因的表达量变化进行分析,获得了多个菌根诱导后表达量显著上升的磷转运蛋白基因,该研究对培育磷高效的茄子新品种、减轻磷肥对环境的污染具有一定的重要意义。
1材料与方法
1.1 实验材料与仪器
1.1.1实验材料
公主白茄种子购自西安市临潼区蔬菜良种开发中心。丛枝菌根由周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室提供。
1.1.2 主要仪器与试剂
Biometra公司的温度梯度PCR仪,Eppendorf Centrifage5424的高速离心机,Thermo的紫外分光光度计,Tanon 2500琼脂糖凝胶成像系统,BIO-RAD CFX96TM Real-time System。cDNA合成试剂盒购自宝生物工程(大连)有限公司,Trizol试剂购自上海拜力生物科技有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 茄子PHT1家族基因的获得
在茄科基因组网站(Sol Genomics Network)中,以拟南芥和番茄的Pht1基因为搜索条件,分析茄子的Pht1基因,并下载其CDS序列,设计实时定量PCR扩增引物,同时以茄子的18S rRNA作为参照基因。
1.2.2公主白茄的培养
将公主白茄种子播种于普通的无菌土中,待公主白茄萌发并长出两片真叶后,将珍珠岩、沙子、营养土、蛭石按照1:1:1:1混合,121℃高压灭菌20min后,将灭菌后的土壤分别接种AM真菌-摩西球囊霉(Glomus mosseae)和地表球囊霉(Glomus versiforme),实验处理如表1。所有的处理都对其进行MS营养液的浇灌(表2),设置低磷(5μmol)和高磷(500μmol)两个浓度梯度,每隔3d施浇和一次。植物光周期16h/8h,温度20/12℃,湿度为70%~80%的培养箱中培养6周后,分别取不同处理的根系,-80℃保存待用。