摘要：建立一个高效液相色谱系统在同一条件下分析双黄连制剂中绿原酸和连翘苷的方法。使用色谱柱为多孔石墨碳柱（4.6mmx100mm，5μm），流动相为乙醇-四氢呋喃-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱，检测波长为278nm。考察了实验条件对分离和保留的影响。在选定的实验条件下，主要成分连翘和绿原酸均能好的分离和检测。方法认证的结果显示，重复性，线性，平均加样回收率分别为99.13%、76.20%,RSD分别为0.58%、0.56%。并用于实际样品的分析。使用较高温度、降低流动相中有机溶剂的含量，可以较为环保的条件下检测分析双黄连片中的绿原酸和连翘苷。

关键词：亚临界水、高效液相、双黄连片、连翘苷、绿原酸

Analysis of components of traditional Chinese Medicine using Subcritical Water as Mobile Phase by High performance liquid Chromatography

Abstract: A high performance liquid chromatography (HPLC) system was established for the determination of Lv Yuan acid and forsythoside in Shuanghuanglian preparations under the same conditions. The chromatographic column consisted of a porous graphite carbon column (4.6mm x 150mm) and a mobile phase of ethanol tetrahydrofuran 0.1% phosphoric acid aqueous solution gradient elution. The detection wavelength was 278nm. The effects of experimental conditions on separation and retention were investigated. Under the selected experimental conditions, the main components of forsythia suspensa and Chlorogenic acid can be well separated and detected. The results showed that the repeatability, linearity and average recovery were 99.14% and 82.1% (RSD = 0.5), respectively.8 / 1.95. And used for the analysis of actual samples. Using higher temperature to reduce the content of organic solvent in mobile phase can be used to detect and analyze Lv Yuan acid and suspensin in Shuanghuanglian tablets under the condition of environmental protection.

Keywords: subcritical water, high performance liquid phase, Shuanghuanglian tablets, Forsythia suspensa, Chlorogenic acid

目录

1.前言1

1.1开题意义 1

1.2高效液相色谱法的发展 1

1.3亚临界水的定义 1

1.4亚临界水高效液相色谱的应用 2

1.5中药成分 3

1.6高效液相色谱在分析中药中的应用 3

2.实验部分 4

2.1 仪器与试剂  4

2.2 实验方法4

2.2.1溶液的制备 5

2.2.2色谱条件 5

2.3结果与讨论 5

2.3.1 实验条件下的色谱分离结果 5

2.3.2 实验条件对分离与保留的影响 6

2.4 方法认证 15

2.4.1 精密度试验 15

2.4.2 重复性试验 15

2.4.3 稳定性试验 16

2.4.4线性关系 16

2.4.5 加样回收率 17

2.4.6样品的含量测定 18

3 讨论 18

4 总结 19

5 致谢 20

6参考文献 21

1 前言

1.1开题依据

随着中药在我国消费总量的份额不断提升，药品的质量以及安全的控制一直是研究的重要课题，随着现代分析技术和仪器水平的提升，药品的质量也在不断提高，我们不再像以前一样用性状鉴别药物的质量，而是发展出以其主要的化学成分含量作为评价药品质量的标准，随着高效液相技术的迅速发展，快速检测也成为可能，本次研究的双黄连制剂就是中药之一，通过查找相关文献发现在分析时采用的多为毒性较高的甲醇[1]以及乙腈[2]这类有机溶剂，本文则在前者研究的基础上更换其中对人体有毒有机溶剂，并降低有机相的使用，采用更为环保的条件使用高效液相色谱法进行药物中绿原酸以及连翘苷的测定。

1.2 高效液相色谱法的发展

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography ，HPLC）又称为“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，使用高压的输液系统，用液体为流动相，泵入不同极性的单一的溶剂或不同比例的混合溶剂以及缓冲液等流动相进入装有固定相的色谱柱，在柱内分离各成分后，然后再进入检测器进行检测，最终实现对试样的分析。在反相色谱中，一般采用非极性键合固定相，如硅胶-C18H37，硅胶-苯基等，用强极性的溶剂为流动相，如甲醇/水，乙腈/水，水和无机盐的缓冲液等。这些通常使用的有机改性剂都具有一定毒性，而水是一种价格相对低廉容易获取的绿色溶剂，但是在室温下极性太强，不适用于分离低极性、非极性化合物。这时我们通过升温使水达到亚临界状态，这时水的极性大大降低（ε＜10），并且亚临界水极性随着温度升高而降低。在T=250℃，P=5~ 35Mpa时水的介电常数已经与乙腈和甲醇的介电常数相近，所以我们可以使用亚临界水代替乙腈和甲醇等溶剂作为流动相。这种使用亚临界水作为洗脱剂的分离方法称为亚临界水色谱（subcritical water chromatography，subWC ）