D.Mekap[6]等人采用梯度的n-癸烷作为流动相，4-二氯苯为固定相，使用蒸汽光散射检测器ELSD，使用德国IDxL多孔石墨碳柱规格：4.6mm×100mm，5μm，流速：1mL/min，进样3.7ml，分离C40-C160的烷烃，实验结果显示方案能成功分离烷烃并依此建立了碳数与色谱洗脱体积的标定曲线。

M.M. Sanagi[7]等人采用高温液相色谱法，氧化锆作为固定相，亚临界水作为流动相，使用30cm×0.5mm的不锈钢管作为预热线圈，使用ZirCHrom毛细管规格为100mm×2.1mm，3μm,进样25μL，分离戊唑醇，已唑醇，丙环唑，苯醚甲环唑混合液。实验结果显示亚临界水完全可以用作洗脱剂分离三唑类杀菌剂，并在100-150℃的高柱温，氧化锆柱上进行有效的检测。

1.5 中药成分

   绿原酸CAS No327-97-9，分子式C16H18O9，分子量354.31。溶解性：25℃水中溶解度约为4%，热水中溶解度更大。易溶于乙醇及丙酮。极微溶于醋酸乙酯。

图1 绿原酸的化学结构

连翘苷的分子式为：C27H34O11  分子量：534.56    CAS号487-41-2

图2 连翘苷的化学结构

1.6 高效液相色谱在分析中药中的应用

汪红等[8]以HPLC-ELSD法测定6种黄芪以及黄芪注射液中的黄芪皂苷IV，III，I的含量，采用Shim-pack ODS柱，规格为150mm×6mm，流动相采用乙腈/水（36:64），流速：0.8ml/min，飘移管90℃，实验得黄芪皂苷IV，III，I的平均回收率为99.25%，99.91%，100.60%，RSD为3.35%，3%，2.91%。

李丽等[9]采用Waters 600LC系统，Alltech 2000型ELSD检测器，检测条件为80℃，使用Capcell PakC18色谱柱，规格为（4.6mm×250mm，5μm）柱温35℃，流动相采用0.2%冰醋酸水溶液和乙腈，流速为0.5ml/min，进样10μL，准确分析了人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd和拟人参皂苷F11，建立了人参和西洋参药材的简便、准确的鉴别方法。

郭忠奎[10]等人采用反相高效液相色谱法使用Agilent1100高效液相色谱仪和DE60400363紫外检测器以及Agilent色谱数据工作站，同时测定了三七安胶囊中三七皂苷和人参皂苷的含量。其实验使用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂，乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱（前三十min体积比为20:80后三十min体积比为30:70）作流动相，流速为1.0ml/min。结果显示该法操作简便，测定结果准确，操作简便。

可见在分析中药成分时，大部分情况采用乙腈或甲醇作为流动相，乙腈和甲醇的毒性都比较大，如果有更清洁环保且毒性低的流动相选择必然更有优势。

2 实验部分

2.1 仪器与试剂

DIONEX UltiMate3000高效液相色谱(Thermo Fisher 公司)配备LPG-3400SD泵、WPS-3000自动进样器、TCC-3100柱温箱、UV(DAD-3000RS)紫外二极管阵列检测器、ChromeleonTM7色谱工作站。高精密天平M2p（精度0.001 mg）。德国Startoriu公司。精密天平（AB204-N型，精度0.1 mg，上海世义精密仪器有限公司）。超声波清洗仪（VGT-2120QT型，400W，40kHz，广东固特超声实业有限公司）。

绿原酸对照品(批号1107-20)、连翘苷对照品(批号111-209)、均由中国药品生物制品检定所提供。双黄连胶囊批号01151003，口服液批180124022、18016022。乙醇、四氢呋喃均为色谱纯,碳酸钠和氢氧化钠以及硫酸、磷酸为分析纯,水为蒸馏水。