1 实验材料

1.1 主要的实验仪器

高速冷冻离心机、超净工作台、分光光度计、高压蒸汽灭菌锅、光照培养箱、冰箱（4 ℃）、PH测试仪、电子天平等。

1.2 实验材料

拟南芥种子、培养土、小花盆、托盘、封口膜、保鲜膜、酒精灯、试管若干、烧杯（1000 ml、50 ml若干）、玻璃棒、容量瓶、镊子。

1.3 实验试剂

MS培养基母液、无菌水、酒精、NaClO。

2 实验处理

2.1 拟南芥种子的处理

实验所用的拟南芥种子是由西北农林科技大学生命科学学院细胞生物学实验室所提供。种子包括突变体植株(A2、A4)，野生型植株（WT）和超表达植株（0E-26-2-2、0E-26-6-3、OE-26-6-7、OE-37-4）三个不同的株系。将选好的一定数量的拟南芥种子置于1.5 ml的离心管中，加入70 %的酒精1 ml 振冲一次，放置4 min后，舍弃上清液；之后，依次加入1 ml的无菌水，振荡冲洗3-4次，舍弃上清液；最后，用振冲的方式加入1 %的NaClO 1ml，放置8min后，舍弃上清液，再依次用1 ml无菌水冲洗5次[6]，最终使干净的拟南芥种子与无菌水的体积比约为1:1。

2.2 培养基的制备

大量成分：硝酸钾38 g、硝酸铵35 g、七水硫酸镁7.4 g、磷酸二氢钾（单独配）3.4 g、二水氯化钙（单独配）8.8 g。

微量成分：一水硫酸锰1.69 g、七水硫酸锌0.86 g、硼酸0.62 g、碘化钾0.083  g、二水钼酸钠0.025 g、五水硫酸铜0.0025 g、六水氯化钴0.0025 g。

铁盐螯合冷藏：FeSO4 2.78 g、EDTA二钠3.73 g。

有机冷藏：甘氨酸0.2 g、盐酸硫胺素0.01 g、盐酸吡哆辛0.05 g、烟酸0.05 g、肌醇10 g。

将配制大量、微量培养基、铁盐敖合和有机冷藏的四种所用到试剂分别溶解，各自定容至1000 ml，取大量常温50 ml，有机冷藏50 ml，微量冷藏10 ml，铁盐敖合10ml混合搅拌均匀，最后用蒸馏水定容至1000 ml[7]。

2.3 灭菌处理

将培养皿洗净后干燥，之后10个一打用报纸包好，标明皿盖的方向，放入高压蒸汽灭菌锅内，进行121 ℃，20 min的高压蒸汽灭菌处理[8]，再将配好的培养基在高压蒸汽灭菌锅内进行115 ℃，15 min的灭菌备用。

2.4 倒平板

将培养基取出，放入超净工作台中进行无菌操作。在培养基凝固前将其倒入培养皿中，高度大概为0.5 cm，稍稍冷却后进行封盖，再次冷凝，倒置备用[9]。

2.5 拟南芥的播种

将拟南芥点种到培养基上，每个培养基内点种100棵，之后放入4 ℃冰箱内进行春化处理，时间为三天。然后置于22 ℃，16 h/8 h的光周期条件下培养一星期，边培养边观察幼苗的长势[10]。之后将长势良好的拟南芥转入土培培养，每个株系种植6盆，每盆栽种5株，拟南芥的土培生长在23 ℃光照培养箱中进行。土培期间给拟南芥浇灌水和1/2 MS营养液，且保持土壤湿润，使植株正常生长。拟南芥在培养箱中生长三个星期后，对实验组进行41 ℃的高温胁迫。胁迫两天之后，分别对实验组和对照组的拟南芥进行常用生理指标的测量。