摘  要：本试验以花生子叶作为外植体，构建了花生新型体细胞胚结构-类珠芽体的诱导体系。将花生未成熟胚的子叶置于一定浓度NAA和2,4-D的MS培养基上，在黑暗条件下进行体细胞胚诱导。结果表明，黑暗条件下，在MS+20.0 mg/L 2,4-D组合对花生体细胞胚诱导效果最佳，平均每个子叶外植体可形成20多个BLB结构，在不改变培养基及光照条件下，单个BLB可以形成3-5个植株。在MS+1.0 mg/L NAA的生根培养基中，丛生芽全部生根。通过对不同发育时期的体细胞胚进行形态学和组织学分析发现，BLB起源于花生子叶外植体的皮层细胞，是一种特殊的SE结构，由于其特殊的形状、诱导条件、体细胞胚的自发再生、具有多胚体等特征，最终成功构建了花生新型体细胞胚结构-类珠芽体的诱导体系。

关键词：花生；体细胞胚；类珠芽体

Peanut Regeneration by Somatic Embryogenesis (SE), Involving Bulbil-like Body (BLB), a New Type of SE Structure

Abstract: The cotyledons of peanut was made as explant in this study, the indcation system of a novel somatic embryo structure, that is bulbil-like body (BLB), was been succesfully construced in the process of peanut regeneration. In this study, the explants of peanut was treated on MS basic media supplyment with 20.0 mg/L 2,4-D  and were incubated in the darkness at 25℃, and we found that, every cotyledon explant formed more than 20 BLBs, and with 100.00 % spontaneously developed multiple plantlets(3-5 plantlets per BLB) in planta on the incubation conditions (PGRs and darkness). At last, the plantlets were treated on MS media supplyment with 1.0 mg/L NAA with rooting induction rate of 100.00 %. The results of morphological and histological analyses in the BLBs development stages of revealed tha cortex cells were the origination zone.

Keywords: Peanut; Somatic embryogenesis; Bulbil-like body

目    录

摘要 1

引言 1

1. 材料与方法 2

1.1 材料 2

1.2 培养准备 2

1.2.1 BLB诱导培养基 2

1.2.2 BLB胚萌诱导培养基 2

1.3 方法 3

1.3.1 外植体材料 3

1.3.2 BLB诱导与再生 3

1.3.3 BLB生根培养 3

1.3.4 BLB胚体形态分析 3

1.3.5 BLB组织学起源分析 4

1.3.6 统计分析 4

2. 结果与分析 4

2.1 诱导结果 4

2.2 BLB胚体的内生起源和发生过程 5

2.3 BLB形态学分析 6

2.4 生长素类似物对BLB诱导的影响 7

3. 讨论 8

参考文献 10

致谢 13

花生新型体细胞胚结构类珠芽体诱导体系构建

引言

花生[1]是一种重要的经济和油料作物，它能够提供大量的蛋白质、脂肪、维生素和其他必需营养素来源[1,2]。可以作为食品，有直接或间接的药用和工业价值。花生生产的产品有很多优势，例如花生油由于它独特的味道，相对较高的沸点和单不饱和脂肪酸含量高，被认为是较为健康的食品。

花生在全世界广为种植，带来了巨大的经济效益。然而，花生生产中有两个比较突出的亟待解决的问题。其一，存储不好的花生可能感染黄曲霉，导致释放一种高度致癌的物质-黄曲霉素。其二，一小部分人对花生过敏。培育种植抗黄曲霉和降低过敏的花生新品种，是未来解决上述问题行之有效的方法。与传统育种相比，转基因育种可以在一个相对短的时间内获得，从而节省了育种时间。高效的再生和转化系统是转基因育种的重要前提，通过在培养基中添加噻苯隆(TDZ)[3,4]，进而直接构建花生的体外再生体系已被成功构建，通过体细胞胚发生(SE，Somatic embryogenesis)构建再生系统也有相关报导[5,6,7]。尽管通过发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes)进行原生质体转化[8,9,10]和直接转化[11]等方法已经形成，但是通过以上述两种方法转化的成功率较低。因此，建立一个新型、高效的体细胞胚介导的再生和转化体系势在必行。