1. 材料与方法

1.1 材料

黑色花生（黑玉珍）由实验室种植和养护。

1.2 培养准备

1.2.1 BLB诱导培养基

在MS基本培养基中添加一定浓度梯度的NAA与2,4-D（0 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、1.5 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L、30.0 mg/L），30 g/L蔗糖，3.6 g/L结冷胶，pH 5.8。

1.2.2 BLB胚萌诱导培养基

首先，直接在BLB诱导培养基中进行原位再生诱导。然后，于1/2MS+1.0 mg/L NAA+30.0 g/L蔗糖+7.8 g/L琼脂粉（pH 5.8）进行根的诱导。

以上培养基均需121℃高压灭菌18 min，备用。

1.3 方法

1.3.1 外植体材料

幼嫩的花生首先用小股水流冲去表面的土壤，冲洗干净，然后用75 %(v/v)乙醇消毒(30 s-1 min)，再用0.1 %(v/v)氯化汞消毒(10-15 min)。用无菌水清洗3-5次后，在无菌水中剥去壳，获得无菌花生种子。带有胚芽和胚轴的子叶，及不带胚芽及胚轴的花生子叶均可作为外植体。

1.3.2 BLB诱导与再生

将外植体分别置于含有不同浓度2,4-D和NAA的MS固体培养基的表面。然后于25 ℃条件下进行黑暗处理或光照条件诱导BLB。BLB的发育过程是用单反相机(EOS600D，佳能，日本)和立体显微镜(SMZ800，尼康，日本)观察。结果表明，黑暗条件下，在MS+20.0 mg/L 2,4-D组合对花生体胚诱导效果最佳，（平均每个子叶外植体可形成26个左右的BLB结构），在不改变培养基的情况下，BLB可形成的多个植株(每个BLB形成3-5植株体)。而经NAA诱导的外植体未有胚状体出现。