1. 材料与方法

1.1 实验材料

市售普通蚕豆。  

1.2 实验方法

1.2.1 实验试剂制备

氯化铜胁迫液的制备：首先称取5 mg氯化铜(优级纯)放入烧杯中，加入少量水，然后全部溶解后移入500 mL容量瓶中，加水定容至刻度，即配成10 mg/L的氯化铜溶液。用相同的方法配制浓度分别为20，40，80，120，240 mg/L的氯化铜溶液。

固定液的制备：无水乙醇：冰乙酸=3:1。

解离液的制备[11]：量取质量分数为36%的盐酸43 mL，倒入烧杯中，玻璃棒引流至500 mL容量瓶中，加入蒸馏水定容，此溶液即为1 mol/L的盐酸。

染色液的制备：制备改良的苯酚品红染色液。

1.2.2 蚕豆种子萌发前处理

挑选无病虫害、饱满的蚕豆种子，用蒸馏水漂洗2次，再用2%的H2O2浸泡消毒10 min，洗净后用蒸馏水浸种1 d，一部分种子用于萌发实验，另一部分种子用于细胞学观察实验。

1.2.3 蚕豆种子萌发实验

将浸泡1 d后的蚕豆种子分组放在小烧杯里，每组10颗蚕豆。第一组为对照，蒸馏水浸泡，第二至七组分别用10，20，40，80，120，240 mg/L的氯化铜溶液浸泡，浸种1 d后，放入大培养皿中进行暗培养，培养温度(25±1) ℃，培养期间每天补充各组对应的处理液。每天记录萌发情况（发芽率、芽长、根长），连续统计4 d。发芽率%=萌发粒数/总粒数×100；芽长、根长分别取10粒平均值。若芽和根弯曲，则可先用细线测量，再将细线拉直，用毫米刻度尺测出细线长度。

1.2.4 蚕豆主根根尖细胞学观察实验

将浸泡1 d后的蚕豆种子放入大培养皿中进行培养，每天补充水分，待主根长至1～2 cm时，分组处理主根。第1组为对照组，不做铜离子胁迫处理；第2组为10 mg/L氯化铜溶液处理；第3组为20 mg/L氯化铜溶液处理；第4组为40 mg/L氯化铜溶液处理；第5组为80 mg/L氯化铜溶液处理；第6组为120 mg/L氯化铜溶液处理；第7组为240 mg/L氯化铜溶液处理。处理时间为4 d，处理结束后，根尖恢复培养1 d，取材制作装片，观察染色体畸变情况及产生微核情况。染色体畸变率=（染色体畸变细胞总数／有丝分裂细胞总数）×100% [13]；微核率=（观察到的微核数目/观察到的细胞数目）×1000‰。