表达载体是把目的基因送入宿主细胞并进行扩增和表达的重要媒介，这个过程离不开载体，离开了载体，目的基因不能进入受体，即便进入受体细胞也不能够表达[1-2]。表达载体的遗传转化可用在新基因的功能分析，也可以用在植物性状的改良与鉴定，使植物通过转入基因获得抗虫 ，抗药，抗逆性等优良性状，从而达到改善品质，提高产量的目的。因此，研究相关表达载体的构建方法有极其重要的现实及应用意义。

   传统载体的构建方法主要基于限制性内切酶的酶切，然后构建入门载体，经过一系列的酶切，连接，转化等步骤来实现【3-4】，整个过程操作麻烦，费时费力，效率低。

随着植物基因工程技术的不断发展和进步，便利于各种研究的各种载体体系和新技术产生。在构建植物表达载体时，为了便于外源基因高效快速表达出现了各种新兴技术，如 Gateway技术；Gateway技术是由Invitrogen 公司开发的关于λ噬菌体位点特异性重组原理进行克隆分析的一项技术【5-7】，这种技术没必要考虑目的DNA的酶切位点，不需要麻烦的连锁反应，而是通过位点进行特异性重组，通过BP反应获得入门克隆后[8]，再通过LR反应将目的DNA以合适的方向连接到各种目的载体上，1h后就可以转化，大大节约了基因克隆的步骤和时间[9-11]。

1.材料和方法

1.1材料

本实验仪器及药品都是由周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室所提供的。

1.1.1实验材料

番茄基因组DNA

模板

BP后质粒编号  Yu235

LR后质粒编号  Yu344

1.1.2实验仪器

PCR扩增仪、高压灭菌锅、超净工作台、37℃培养箱、37℃恒温摇床、离心机、冰箱、精密电子天平、移液枪、烘箱、恒温水浴、电泳仪、电泳槽凝胶成像系统等。

1.1.3实验试剂

大肠杆菌感受态，农杆菌感受态均由实验室提供，pDONR207、BP酶、LR酶、Loading Buffer、2KMaker、2×PCRMix酶、蒸馏水、琼脂糖凝胶、核酸染色剂、TAE缓冲液等。