1．3．2．7  最佳交联时间    称取0.2g预处理好的树脂于离心管，加入0.1mL部分纯化酶液和2.9mL50mM以上测得最佳吸附pH值的醋酸-醋酸钠缓冲液。在最佳吸附温度下，反应最佳吸附时间。冷却后，加入戊二醛溶液与上述混合液混匀，使其最终浓度为最佳戊二醛浓度，在最佳交联温度下交联若干小时(0.5h、1h、2h、3h、4h)，用蒸馏水洗涤2~3次。DNS法测定固定化酶的活性，确定最佳交联时间。每组3个重复。

1．3．3 固定化Ci1-FEH IIA酶最适温度    以2%菊粉溶液为底物，分别加入0.2g固定化Ci1-FEH IIA酶，在30℃、40℃、50℃、55℃、60℃条件下反应1h，分别取样测定酶活。每组3个重复。

1．3．4  菊粉酶解反应    称取1g、2g、4g、6g和8g菊粉于蒸馏水中分别溶解，使其最终质量分数为5%、10%、20%、30%和40%，DNS法测定果糖。称取0.2g固定化酶至离心管中，分别加入5mL的不同浓度菊粉溶液，在50℃下反应1h、6h、12h、24h、36h、48h、60h及72h，每个时间段取出100μL反应溶液，DNS法分别取样测定果糖含量。每组3个重复。

1．3．5  菊芋块茎提取液制备及其酶解反应    菊芋块茎清洗切块捣碎，在50ml离心管中分别添加20g、10g和6g的菊芋块茎和根据料液比1:2、1:4、1:6添加一定体积的水。将其置于80℃恒温水浴锅内。经20min的保持加热，取出冷却至室温。反复浸提3次后过滤溶液。为了解菊芋提取液料液比对固定化Ci1-FEH IIA酶水解菊粉生成果糖含量的影响，本实验选用0.2g固定化Ci1-FEH IIA酶在pH7.0，最适温度下，分别与1mL料液比为1:2、1:4及1:6的菊芋块茎提取液反应2h、4h、8h、12h、24h、36h和48h后，每个时间段取出100μL反应溶液，DNS法分别测定果糖含量。每组3个重复。酶解前后的糖分图由HPLC测得。

1．3．6 测定方法    DNS法测定还原糖[17]；菊芋块茎提取液酶解产物糖分分析采用高效液相色谱法[18]