摘  要：从河南省郑州市3个苦瓜种植园区采集苦瓜枯萎病样品，采用组织分离法分离，获得了23株病原菌菌株。根据病原菌的培养性状、形态特征观察结果，结合分子系统学研究方法对其进行分类鉴定，结果表明，所获得的苦瓜枯萎病菌为尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum Schl）。在此基础上，对这些病原菌进行了致病性测定和寄主专化性测定，结果表明，这些病原菌对4个苦瓜品种具有明显的致病性，而对其他的供试瓜类没有致病性，因此，可证明苦瓜枯萎病是由尖孢镰刀菌苦瓜转化型(Fusarium oxysporum f.sp. momodicae Sun ＆Huang)引起的。

关键词：苦瓜；尖孢镰刀菌；分类鉴定；致病性测定

Isolation and Identification of Fusarium Species from Wilted Bitter Gourd in Henan Province

Abstract:  23 strains of pathogenic bacteria were isolated from 3 bitter melon planting garden in Zhengzhou City, Henan province. According to the result of pathogenic bacteria culture characteristics, morphological characteristics and observation, combined with molecular system research methods in the for classification and identification. Results show that, the obtained Bitter Melon Fusarium Wilt (Fusarium oxysporum Schl) Fusarium oxysporum. Based on, for these pathogens of pathogenicity and host specificity determination. The results showed that these pathogens of four varieties of balsam pear has obvious pathogenicity, and the other for tested melon is not pathogenic, therefore, can prove bitter gourd wilt by Fusarium oxysporum balsam pear transformation (Fusarium oxysporum f.sp. Momodicae sun Huang) caused.

Key words: Bitter Fusarium oxysporum Classification and identification Pathogenicity assay

目    录

摘  要 1

关键词 1

引言 1

1 材料与方法 3

1.1 实验材料 3

1.1.1 实验试材 3

1.1.2 主要培养基 3

1.1.3仪器设备 4

1.2 主要实验方法 4

1.2.1苦瓜枯萎菌的分离和纯化 4

1.2.2 柯赫氏法则的验证 4

1.2.3苦瓜枯萎菌的培养及形态学观察 4

1.2.4病原菌的DNA提取与标记基因DNA序列分析 4

1.2.5 枯萎病菌的致病性测定 5

2.结果与分析 6

2.1病原菌的获得 6

2.2病原菌的鉴定 7

2.2.1 培养性状 7

2.2.2 形态特征 7

2.2.3 rDNA ITS和 EF的PCR扩增结果与序列分析 8

2.3 致病性测定 9

2.4珂赫氏法则验证 11

3. 结论与讨论 11

参考文献 12

致谢 14

河南省苦瓜枯萎病病菌的分离鉴定

引言

枯萎病是瓜类作物的灾难性病害之一，该病害是一种土传真菌病害，农作物整个生长期都能发病，但以开花期和结果后发病最盛。被害植株幼苗期表现为子叶和接近子叶的两片真叶变黄枯萎，中午萎蔫下垂，似缺水状，但萎蔫叶早上和晚上能够恢复正常，随后萎蔫叶片逐渐增多，遍及全株。结果期病株叶片出现黄色网状条纹，中午萎蔫，浇水后即可恢复，持续几天后，茎基部萎缩，整株枯萎，切开病茎观察，可见维管束呈深褐色或黄褐色。近年来，由于设施农业的广泛推广，瓜类重茬面积扩大，瓜类枯萎病发病率约为15%~20%，严重时高达80%，减产40%以上，甚至绝产，严重影响瓜类等经济作物的产量和品质，制约农业的可持续发展[1]。

苦瓜是重要的保健蔬菜之一，食用苦瓜具有清热消暑、养血益气、补肾健脾、滋肝明目和减肥等功效，苦瓜中的苦瓜素被誉为“脂肪杀手”能使摄取脂肪和多糖减少，随着人们生活水平的提高其药用价值日益凸显，在我国广泛种植，具有较高的经济效益，一般亩收益可达6000～8000元，最高可达万元以上。但是随着种植面积的不断增大，且普遍存在重茬连作现象，苦瓜枯萎病致病菌基数逐年增加，苦瓜枯萎病害的危害日趋严重，加之，由于化肥和化学农药的不合理施用，导致土壤微生态环境恶化、土壤中碳/氮比失调，农药化肥残留、病虫抗药性增强等一系列困扰苦瓜生产的问题，严重影响了苦瓜种植的经济效益和社会效益。苦瓜枯萎病是典型的植物土传病害，土壤微生态环境和气候条件是影响苦瓜正常生长和枯萎病发生的重要生态因子，适宜的土壤微生态环境和气候条件也是苦瓜优质高产和彰显质量风格特色的决定性因素。但气候条件具有不确定性和不可控性，生产中只有适应性利用之，因此，对土壤微生态的调节和利用便成为苦瓜枯萎病防控的重要策略，尤其在缺乏稳定的高抗品种的苦瓜生产中，可通过调节土壤微生态功能来保障苦瓜的健康生长和有效控制枯萎病的发生为害。研发以作物健康生长为中心、以土壤微生态调控为基础、以抗耐病品种选育为保障的可有效防控连作地苦瓜枯萎病危害的综合治理关键技术，并大面积推广应用，可真正实现化肥农药减量使用的现代农业发展要求，对提高苦瓜产量、保障苦瓜质量和维持苦瓜种植业的可持续发展具有重要意义。