1.2 构建实验环境

向培养瓶中分别加入200 g的土样，加入100 mg/kg Fe2+溶液，然后加等量的去离子水，之后加水至高于土层3 cm，每个加入量三个重复分别命名为LCK1、LCK2、LCK3、LFe1、LFe2、LFe3，在25℃下培养25天。

1.3 土壤理化性质分析

具体步骤参见《土壤农业化学分析方法》[9]

1.4 微生物总DNA的提取与纯化

所有土壤样品均采用Omega公司的土壤微生物总DNA提取试剂盒提取土壤微生物总DNA[14]，具体操作步骤参见试剂盒说明书，提取完毕用0.8% 的琼脂糖凝胶电泳检测DNA浓度，将提取DNA于-20℃保存备用。具体操作步骤如下：

1）称取0.5 g土壤样品于装有0.5 g玻璃珠的2 mL离心管中；

2）加入1 mL SLX-Mlus Buffer，以最大转速涡旋3-5 min；

3）加入100 μL DS Buffer，涡旋混匀样品；

4）70℃水浴10 min，颠倒混匀2次，95℃水浴2 min，3000 × g室温离心3 min；

5）将800 μL上清液转移至新的2 mL离心管中，加入270 μL P2 Buffer，充分混匀，冰浴5 min；

6）13000 ×g，4℃离心5 min，小心转移上清液至2 mL离心管中；

7）加入0.7倍体积的异丙醇，颠倒混匀20~30次；

8）13000 ×g，4℃离心10 min，弃上清液；

9）加入200 μL Elution Buffer混匀，70℃水浴10-20 min，溶解DNA沉淀；

10）加入100 μL HTR Reagent，充分混匀样品（HTR Reagent使用前需先混匀），室温静置2 min；

11）13000 ×g离心2 min，转移至新的2 mL离心管中（若上清液仍颜色很深，重复10-12步）；

12）加入等体积的XP1 Buffer，混匀，将上清液转移至吸附柱中，10000×g室温离心1 min；

13）弃滤液，重复使用吸附柱，加300 μL XP1 Buffer，10000×g离心1 min，弃滤液，将吸附柱转移至新的2 mL离心管中；

14）加700 μL SPW Wash Buffer，10000×g离心1 min，弃滤液，重复2次；

15）13000×g室温空甩2 min，将吸附柱转移至新的1.5 mL离心管中；

16）加入30~100 μL Elution Buffer室温静置15 min，13000×g离心1 min，收集滤液即DNA，于-20℃保存。