摘要：番茄斑萎病毒（TSWV）是一种可系统侵染番茄、辣椒、烟草、心叶烟、百日草、莴苣等农作物的危害农产品的重要病毒。Sw-5b是植株抗TSWV的抗病基因，并已经证实抗病基因Sw-5b上cc结构域与植物的抗性表达有关。在蛋白质与蛋白质互作的研究方法中，酵母双杂交方便、灵敏度高并且高效，所以本实验就是采用这种方法进行筛选互作的因子。酵母双杂交是一种非常有效的分子生物学技术可有效地用来分离能与一种已知的靶蛋白相互作用的蛋白质的编码基因，它利用酵母遗传学方法在真核细胞体内研究蛋白质之间相用。本实验利用酵母双杂交技术对与Sw-5b上cc结构域的互作因子进行筛选，进而研究抗性基因Sw-5b上cc结构域参与植物抗番茄斑萎病毒的机制原理。

关键词：酵母双杂交；番茄斑萎病毒；互作因子；抗性基因Sw-5b

The yeast bihybridization technique screened the host protein factor of the CC structure domain on the Sw of the tomato immune receptor protein (sw-5b)

Abstract：Withering tomato spot virus (TSWV) is a kind of important virus damage to the agricultural production, can infect tomato, pepper, tobacco, leaf tobacco, one hundred grass, lettuce, etc. Sw-5b is a gene of resistancing to TSWV , and have confirmed that the resistance genes Sw-5b cc structure on the domain related to plant resistance to express. Yeast two hybrid is the study of protein - protein interactions in all methods of the simple, sensitive and efficient one way. It is the use of yeast genetics methods in the study of eukaryotic cells in vivo protein of very effective interaction between molecular biology techniques, can be effectively used to separate that can interact with a known target protein genes encoding proteins. This experiment mainly using yeast two hybrid technology to cc structure domain that interactions with Sw-5b factor screening, which research on resistance gene Sw-5b cc structure domain involved in plant resistance to tomato patch Withers the mechanism principle of the virus.

Key words: Yeast two hybrid；TSWV；interacting factor ；Sw-5b

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摘要1

关键词1

Abstract1

Key words1

引言1

实验方法2

1.CC表达载体的构建2

1.1材料 2

1.2方法 2

1.2．1目的载体的回收2

1.2. 2目的片段的扩增与回收3

1.2. 3目的片段和载体酶切并回收3

1.2. 4目的片段和载体的连接和转化4

1.2. 5菌落PCR并提取阳性菌株的质粒4

1.2．6 PCR验证4

1.2．7扩增并送测分析4

2.转化Y2HGold酵母菌株 5

2.1酵母感受态细胞的制备 5

2.2转化酵母感受态 5

3.双杂交文库筛选  5

3.1材料 5

3.2方法 6

3.2．1与本氏烟的酵母文库融合 6

3.2．2涂板 6

结果7

1．1样品检测7

1．2序列分析7

2.转化酵母结果7

3.1共转验证结果 7

3.2共转验证结果分析 8

3.2.1共转验证过程中质粒发生丢失9

3.2.2同一个酵母菌落中含有多种质粒9

3.2.3实验材料与操作过程的问题10

3.2．4改进方法10

致谢11

参考文献12

图1 阳性菌落质粒 PCR扩增结果7

图2与文库融合后的菌株在四缺板上的生长情况8

图3 CC与互作基因共转酵母结果8

图 4 共转验证过程中质粒 PCR验证 9

图 5  10个单菌落酵母质粒序列同源性分析9

酵母双杂交技术筛选与番茄免疫受体蛋白Sw-5b上CC结构域互作的宿主蛋白因子

引言

近年来，由于生产工具的农业生产结构的改变以及全球粮食作物贸易的扩大，导致各种病虫害在全球传播蔓延危害。由于农业产业结构发生巨大改变，番茄斑萎病毒（TSWV）随着虫媒介体蓟马进入我国，并对我国的大部分烟草种植区带来了严重的生产危害[1]。在前人的研究中，酵母双杂交在病毒学上的研究应用方面已经有显著效果，并且在研究蛋白质互作领域也有一定的成效。研究抗性基因sw5b上cc结构域的某个因子参与植物抗番茄斑萎病毒的机制原理，有利于进一步防治番茄斑萎病毒危害作物为育种[3-4]和转基因提供理论基础。培育抗性品种是防治番茄斑萎病毒的一种有效的防治措施。