酵母双杂交技术筛选与番茄免疫受体蛋白Sw-5b上CC结构域互作的宿主蛋白因子(2)

番茄斑萎病毒(TSWV)属于布尼亚病毒科(Bunuyaviridae)番茄斑萎病毒属(Tospovirus),其中番茄斑萎病毒属是布尼亚病毒科中唯一一个可以侵染植物的属,是Tospovir


番茄斑萎病毒(TSWV)属于布尼亚病毒科(Bunuyaviridae)番茄斑萎病毒属(Tospovirus),其中番茄斑萎病毒属是布尼亚病毒科中唯一一个可以侵染植物的属,是Tospovirus内发现的第一个病毒—番茄斑萎病毒命名该属属名[5]。1944年,我国的第一例番茄斑萎病毒是由国内的研究员魏景超在成都发现的。经过研究者的不断研究和论证,已经明确了Sw-5b是番茄斑萎病毒的抗性基因[6-8]。Sw5b是抗番茄斑萎病病毒的抗性基因,这个研究结果为后续的蛋白质互作研究提供了重要的理论依据 [9-11]。

酵母双杂交体系又名相互作用陷阱(lnteraction trap),它是由Fields在研究真核基因转录调控中提出并初步建立 [12]。鉴于人们对酵母转录因子GAI4的认识水平达到一定水平,才建立了较为完整的系统。完整的酵母转录因子GAI4可分为2个结构域,一个是编码DNA-BD的片段,另一个编码AD基因,这两个结构域在结构上可以分开并且功能上也相互独立,只有当两者靠近结合时才能激活GAI4。将编码BD-DNA的基因与待研究蛋白构建在同一个载体,编码AD的基因与已知蛋白构建在同一个载体,将两个载体进行共转验证。如果已知蛋白和研究蛋白之间存在相互作用,能够形成蛋白-蛋白复合物,使GAL4 的2个结构域AD和BD相互接近, 这个连接好的整体与基因上游的报告因子结合,激活转录因子并启动转录,使下游的基因转录表达。相反,如果两个蛋白之间不存在相互作用,那么BD与AD就不能接近, 不能形成完整的酵母转录因子GAI4,最终无法启动转录表达。本实验利用Ade、His、Leu、Trp四种氨基酸的合成情况进行判断这两个基因是否发生互作。将相互作用中的已知蛋白进行检测,就能够找出研究蛋白与之作用的因子,可对它们之间作用的机制进行研究。酵母双杂技术在病毒蛋白和宿主蛋白的研究上已取得一定的成果,并在医学上也有一定的应用[13]。