1.3.5丙二醛(MDA)的测定 游泳实验结束后,立即摘取眼球取血,取的血液用液氮保存,待用。实验时,取0.1ml血液,实验分为4组: 标准管、空白管、测定管、
1.3.5丙二醛(MDA)的测定
游泳实验结束后,立即摘取眼球取血,取的血液用液氮保存,待用。实验时,取0.1ml血液,实验分为4组: 标准管、空白管、测定管、对照管。所加试剂分别是:
标准管 空白管 测定管 对照管
10nmol/ml标准品(ml) 0.1
无水乙醇(ml) 0.1
测试样品(ml) 0.1 0.1
试剂一(ml) 0.1 0.1 0.1 0.1
混匀(摇动几下试管架)
试剂二(ml) 3 3 3 3
试剂三(ml) 1 1 1
50%冰醋酸(ml) 1
加完后用旋涡混匀器混匀,试管口用保鲜薄膜扎紧,用针头刺一小孔,100℃沸水浴40分钟,取出后流水冷却,然后3600转/分,离心10分钟,取上清,532nm处,1cm光径,蒸馏水调零,测各管吸光度值。
根据公式:
1.3.6血尿素氮(BUN)的测定
血尿素氮的测定方法同丙二醛类似,根据血尿素氮试剂盒的方法,实验分为3组:空白管、标准管、测定管。所加试剂分别是:
空白管 标准管 测定管
双蒸水(ml) 0.02
BUN标准液(ml)(10mmol/L) 0.02
待测样本(ml) 0.02
试剂一(ml) 1 1 1
试剂二应用液(ml) 1 1 1
加完试剂后混匀,置沸水中准确水浴15分钟,立即用自来水冷却。用波长532nm,1cm光径玻璃比色皿,双蒸水调零,测定各管OD值。
根据公式:
1.3.7肝糖原含量的测定
游泳实验结束后,摘眼球取血后脱颈处死,同时取出肝脏和肌肉,-196℃液氮中保存待用。实验时,称取肝脏0.5g于试管内 ,放入盛有30KOH溶液1.5ml的试管中,置沸水浴中煮20分钟,取出后冷却,将管内容物全部移入50ml容量瓶,加水至刻度。然后,取干燥试管3组,测定管、标准管、空白管。