1.3糖尿病与心脑血管疾病的关联

糖尿病大血管慢性并发症包括心、脑和周围组织大血管病变，主要以动脉粥样硬化为病理根本[3]。高糖对内环境稳态的影响能直接或间接导致细胞凋亡，尤其是血管内皮细胞所发生的凋亡[4]。冠心病全称为冠状动脉粥样硬化心脏病，美国胆固醇教育计划成人组指南提出糖尿病是冠心病的“等危症”[5]。糖尿病患者的高血脂症状会刺激血管平滑肌，经脂质合成途径导致血管病变，引起血管壁内皮细胞溶酶体的脂肪酶活性降低，出现动脉粥样硬化[6]，而动脉粥样硬化则会进一步引起大血管病变。

T2DM大血管并发症除与糖脂代谢紊乱有关外，也与其他致病因相关，其中可能包含炎症和血管内皮细胞功能的损伤[7]。血管内皮细胞功能障碍可能是糖尿病大血管病变的始动环节[8]。血管内皮细胞介于循环血液与血管平滑肌之间，作为血管和血管组织之间的被动屏障层，也感知和应对外界刺激。血管内皮细胞血管活性物质分泌异常及形态和功能损伤可能导致血管病变，进一步导致动脉粥样硬化，与糖尿病及其大血管并发症的发生、发展密切相关[9-11].

1.4内皮细胞老化

研究发现，血管内皮功能障碍与衰老相关疾病密切相关[12]。作为血管衰老的关键点，血管内皮细胞老化可以引起血管功能的紊乱，并导致一系列的血管性疾病的发生[13]。血管内皮细胞通过合成和释放多种活性物质调节血管功能，对维持血管稳态有重要作用。血管内皮细胞老化过程中分泌多种可引起促炎症的因子，这些炎性因子可能触发单核细胞粘附并进入血管壁，从而参与动脉粥样硬化的发展[14]。

研究表明，NO作为血管内皮细胞分泌的主要血管舒张因子，可以调节血管舒缩、维持凝血溶栓平衡[15]。细胞老化时，NO分泌减少，因此，将NO作为判断细胞老化的指标。本次实验将通过对炎性因子和NO分泌来研究血管内皮细胞老化的机制。

1.5人脐静脉来源的血管内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVEC）

人脐静脉内皮细胞因其取材容易，操作方便，且具有干细胞的潜能，理论上可以传代50-60次，目前已经成为研究血管内皮细胞体外实验的重要材料，应用于研究血管内皮细胞的细胞生理特性，同时也作为研究由内皮细胞功能障碍引起的心脑血管疾病发病机制的模式细胞。本次实验以人脐静脉血管内皮细胞为培养模型，通过传代培养，获得细胞进行实验。此外，利用高浓度的葡萄糖处理（30mM）来诱导内皮细胞的老化。

1.6曲克芦丁（Troxerutin）

曲克芦丁是一类重要的天然提取物，系芦丁经羟乙基化制成的半合成黄酮类混合物，具有良好的生物活性，被广泛应用于临床药物研究[16]。研究发现，曲克芦丁具有抑制红细胞和血小板凝集，防止血栓形成，疏通血管的作用[17]。曲克芦丁易溶于水，能够被人体吸收。但是，关于曲克芦丁对内皮细胞老化的影响，目前研究甚少。为探讨曲克芦丁的作用，在本实验中，我们利用曲克芦丁处理高糖诱导的老化的人脐静脉内皮细胞，研究曲克芦丁对细胞存活和内皮细胞老化作用的影响。

2  材料与方法

2.1 主要仪器设备

培养皿购自Corning；倒置相差显微镜购自Leica公司；超净工作台购自苏州净化设备厂；FA1104电子天平购于上海天平仪器厂；自动高压灭菌器购于zealway,美国；Primor公司的离心机，；酶标仪购自BioTek；上海实验仪器总厂的干燥箱；Eppendorf公司的微量移液枪和移液器；milipore的双重纯水仪；CO2培养箱购自Thermo；上海精宏实验设备有限公司的恒温水浴锅。

2.2 主要试剂与材料