摘要：本研究通过将健康的猪胸腺经过匀浆、反复冻融、酶解、热变性、离心、粗滤、病毒灭活、除菌过滤、纳米膜过滤等途径的处理获得胸腺肽粗产品的过程。经过乙醇沉淀以及Sephadex层析柱纯化胸腺肽溶液，并使用高效液相色谱法（HPLC）来进行纯化程度的检测鉴定。将制得的纯化后胸腺肽按照不同量分别注射健康小鼠体内，每组小白鼠最终都存活，实验得到纯度较高、活性较强的胸腺肽产品。

关键词：胸腺肽；反复冻融法；高效液相色谱法（HPLC）

The Research of Thymosin by Extraction and Purification

Abstract: Crude thymosin products was got in the study by the healthy pig thymus being homogenated, repeated freezing and thawing, enzymatic hydrolysis, thermal denaturation, centrifugation, and the coarse filter, virus inactivation, sterilization filter, nano-membrane filter and so on. After ethanol precipitation, thymosin solution was purified by column chromatography with Sephadex, and high performance liquid chromatography (HPLC) was used for detection and identification of the degree of purification. Finally healthy mice were injected with purified thymosin prepared in accordance with the different amounts in vivo, mice in each group eventually survived, It was inferred that high purity, strong activity of thymosin products was got in the experiments.

Keywords: Thymosin; Repeated freezing and thawing method; High performance liquid chromatography (HPLC)

目    录

摘要 1

引言 1

1材料 2

1.1实验材料 2

1.2试剂、仪器和设备 2

2方法 2

2.1 胸腺肽的提取 2

2.1.1原料预处理 2

2.1.2制匀浆以及反复冻融法 3

2.1.3酶解处理、热变性 3

2.1.4离心、粗滤 3

2.1.5除菌过滤、纳米膜过滤及保存 3

2.2胸腺肽的分离纯化 4

2.2.1乙醇沉淀、PBS溶解 4

2.2.2凝胶层析 4

2.3纯化检测 4

2.3.1检测方法的选择 4

2.3.2高效液相色谱法（HPLC）的鉴定 4

2.4胸腺肽注射小白鼠 5

3结果与分析 5

3.1分离纯化结果 5

3.2 HPLC测定结果分析 6

3.3小白鼠注射结果分析 7

4 讨论 7

参考文献 10

致谢 11

胸腺肽提取与分离纯化的研究

引言

胸腺肽(Thymosion)一般指由胸腺的组织上皮细胞分泌的具有生理活性的一组多肽类激素[1]。它一般情况下广泛地存在于脊椎动物胸腺组织中。例如，牛、猪、鼠、羊、还包括人类，在这些脊椎动物们的胸腺、脾、肝脏、心脏中都有分布，但是在胸腺中含量最高 [2]。胸腺肽主要是由分子量为9.6KDa以及7KDa左右得两类蛋白质组成的。含有RNA、DNA对热比较稳定，一般加热到80℃时，其生物活性不降低，但是被水解成了氨基酸后，生物活性消失[3]。有活性的胸腺肽具有调节和增强人体细胞免疫功能的作用；有着较好的抗衰老以及抗病毒的效果。同时也可以用来治疗各种原发性和继发性的免疫缺陷病（儿童先天性免疫缺陷病等），还有免疫功能失调所引起的一些疾病（红斑狼疮等）[4]。同样对肿瘤的治疗也有很好的辅助效果。也可以用来治疗再生性贫血，急慢性病毒肝炎等。而且随着社会不断发展, 人们逐渐增强在食品营养以及食品安全性方面的意识, 所以环保意识也变成重中之重, 于是就需要通过不断地加强和改善动物体内分泌来控制和促进其生长，来更好地完善胴体品质以及风味，从而就解决了使用添加剂虽然促进生长但会造成肉质下降和一些药物的残留之间的矛盾[5]。胸腺肽的出现就可以很好的达到了这个目的，胸腺肽因为能够提高动物们机体的免疫功能, 能够产生大量的细胞因子，就很好的调节了动物的内分泌和代谢, 加强了动物的生长, 也可以获得较高的经济方面的收益[6]。但是目前来看胸腺肽的提取成本过高, 就很大程度上限制了胸腺肽在实际生活中的普及和应用,因此对胸腺肽的提取以及研究对社会以及人们的生活都有非常重要的意义和作用。