内生真菌，指的是在生活史中的一定的阶段生活在植物体内但对宿主植物无明显危害的一类真菌，它是一个大的类群，种类繁多。研究发现，几乎所有的植物都有内生真菌。［3］内生真菌与宿主植物在长期的共进化过程中，形成稳定的互利共生关系。研究发现,个别植物内生真菌能产生与宿主相同或相似的成分或其他特殊的生理活性物质,因此对于来源于植物的内生真菌的生理活性物质的筛选也开始受到重视。研究表明内生真菌是产生新化合物的源泉，代谢产物可产生多种活性物质，包括抑菌活性物质，这为从内生真菌中寻找新型抗菌药物提供了材料。它作为新兴的微生物资源，具有以下许多优点：操控简单、繁殖快、产量大、成本低、代谢旺盛、易培养等，因此具有某种活性的内生真菌便于大规模的发酵生产，还可以通过诱变育种等来提高菌株的性能。筛选能够产生生物活性物质的内生真菌已成为微生物学的研究热点，对于新药研发具有重要的意义。

羽叶丁香 (Syringa pinnatifolia)是我国特有的多年落叶灌木,羽状复叶，生长在海拔2000-2500的山上，目前野生种群的数量和栖息地范围越来越小。[4]花枝近圆柱或四棱型，具有皮孔。奇数羽状复叶，植株美观、根系发达、抗寒、耐旱，主要分布于陕西南部、甘肃、青海东部和四川西部以及内蒙古和宁夏交界的贺兰山地区。它既是中医的名贵药材，同时也可作为观赏灌木。[5]而目前对于羽叶丁香内生真菌的研究在国内外鲜见相关报道。

我们以羽叶丁香的枝条为材料，从中分离内生真菌并研究其代谢产物的抑菌活性。在从羽叶丁香提取物中筛选菌株的过程中，发现其中一株内生真菌具有抑菌活性，它的代谢产物对多种细菌具有抑制作用，具有开发成新抗生素的潜力。一方面分离并保藏羽叶丁香内生真菌，保护羽叶丁香内生真菌资源，另一方面为开发利用羽叶丁香内生真菌提供基础理论和理论依据。

2材料与方法

2.1 菌株

本实验所用的细菌包括：大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。上述菌株保存在江苏师范大学江苏省药用植物生物技术重点实验室。

2.2 枝条采集

  样品采自甘肃省吐鲁沟国家森林公园，选取多株健康的羽叶丁香 (Syringa pinnatifolia)，每株随机剪取20cm左右长度的枝条。

2.3 仪器

本实验所用仪器名称、型号、生厂厂家见下表

仪器名称 仪器型号

霉菌培养箱 BMJ-250

电子天平 BT-124S

旋转蒸发仪 真空泵 SHZ-D（III）

超净工作台 SW-CJ-1F

恒温培养箱 DNP-9052

离心冷冻浓缩仪 LNG-T98

高压灭菌锅 LDZX-50KBS

恒温摇床 TCYQ

磁力搅拌器 85-2

冰箱 BCD-218UN

酶标仪 00038425

通风橱 ZJ-TFG-12

光学显微镜 CX41.1.1

2.4试剂

马铃薯葡萄糖琼脂培养基（potato dextrose agar，PDA）：新鲜的土豆，将表面清洗干净去皮，切成小块称200g。加入自来水小火煮约30min左右，取液体过滤到烧杯中。再在烧杯中加入葡萄糖40g和去离子水至2000ml。搅拌均匀后，在加入了3.4g琼脂的锥形瓶中倒入200ml已配液体，灭菌后备用。

溶菌肉汤培养基（lysogeny broth，LB），在烧杯中加入称取好的胰蛋白胨10g、酵母粉5g以及NaCl 10g，再加入1000mL的去离子水，搅拌均匀，分装到5个锥形瓶中，灭菌备用。

2.5实验材料

羽叶丁香 (Syringa pinnatifolia)枝条（采在甘肃兰州吐鲁沟国家森林公园）离心管（规格：10ml）、EP管（规格：2ml）、三角瓶（50ml），接种针，涂布棒，培养皿（90mm），、EP管（规格：2ml）、黑色签字笔，无菌96孔板，烧杯