二、研究的基本内容和拟解决的主要问题

试验通过使用纳米蛋白酶催化氨基酸酯，旨在解决以前单纯通过蛋白酶来催化氨基酸酯生成的低聚肽所存在的问题，诸如低聚肽聚合度过高、分子量分布分布比较广、催化效率不太高等问题。

由于氨基酸聚合生成蛋白质的条件严苛，所以在其他溶液中聚合多少都会对蛋白质的活性存在一定的影响。我们采用水相或两相界面聚合来催化酪氨酸和脯氨酸。固化蛋白酶是一种高效催化酶，对氨基酸有着良好的催化效率，酶的稳定性和可重用性较高可反复多次利用。我们采用糜蛋白酶沉淀来测试其是否能够比较良好地催化酪氨酸酯和脯氨酸酯进行低聚。

三、研究方法及措施（拟采取的研究手段及技术路线、实验方案等）

我们采用在25-40℃下利用α-糜蛋白酶和木瓜蛋白酶在缓冲溶液中进行对酪氨酸和脯氨酸的聚合，用柠檬酸缓冲液和磷酸盐缓冲液分别调整PH在5.6和7-8。酶的浓度控制在30mg/ml左右，底物浓度控制在0.5M，反应30分钟。反应结束时再离心收集沉淀物，用0.1M盐酸溶液洗涤两次后用蒸馏水洗涤一次，即可得到相应的产物。此时的产量大约在30%-50%左右。

然后用核磁共振光谱记录400或300兆赫，用于定性检测聚合上去氨基酸种类。用MALDI-ToF在反射模式下，以α-氰基-4-羟基肉桂酸为基质对照组，样品溶解在（3mg/ml）的TFE的溶液中，旨在测定聚合度。MALDI-ToF测定条件温和，故不会造成在分析过程中造成的低聚物分解的现象。

四、研究工作的步骤与进度（课题研究在时间和顺序上的安排）

2015.12-2016.02    查看文献资料，撰写文献综述。

2016.02-2016.03    进行开题报告和文献综述的撰写。

2016.03-2016.04中  进行氨基酸的聚合实验以及改进实验。

2016.04-2016.05    对毕业论文进行后续撰写。

2016.05           准备答辩。

五、主要参考文献（作者、书名、论文题目、出版社或出版号、出版年月或出版期号。文科不得少于15篇，理科不得少于10篇，其中外文文献应不少于2篇）

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