实验选取无菌苗的相同部位，如茎、花梗、幼叶等部位，用无菌刀片截取5mm左右的石斛切段，将切段分别接种到两种诱导培养基中。每次每种培养基接种10瓶，每瓶接种4个切段。见光培养2个月。

诱导培养基：

① 1/2MS + 0.25mg/L TDZ + 0.2mg/L NAA + 5g/L 活性炭   PH调至5.8

② 1/2MS + 0.5mg/L TDZ + 0.2mg/L NAA + 5g/L 活性炭    PH调至5.8

1.3.2.2不同部位对圆球茎诱导效果的影响

实验采用相同的诱导培养基，选取石斛的不同部位， 如茎、花梗、幼叶作为实验对象，用无菌刀片切取5mm左右的石斛切段，将切段接种到诱导培养基中，每次每种部位的培养基培养7瓶，每瓶接种4个切段。见光培养2个月。

1.4圆球茎的继代

将培养2个月的圆球茎进行继代培养，将圆球茎从原培养基移接到新配置的对应的培养基中，见光培养2个月。

四、研究工作的步骤与进度（课题研究在时间和顺序上的安排）

1 2015年9月-11月 铁皮石斛无菌苗的继代，扩大培养

2 2015年11月-12月 铁皮石斛的茎、花梗、幼叶进行圆球茎诱导培养，不定期观察诱导的圆球茎生长状况

3 2016年12月-1月 由前期圆球茎诱导状况，相对改进培养条件，继续进行圆球茎诱导培养

4 2016年12月-1月 撰写开题报告

5 2016年1月 进行铁皮石斛无菌苗的继代培养，保证实验材料充足

6 2016年1月-3月 不定期观察诱导的圆球茎生长状况，并对实验现象进行记录，继续进行诱导培养

7 2016年3月 进行铁皮石斛无菌苗的继代培养，保证实验材料充足

8 2016年3月-4月 不定期观察诱导的圆球茎生长状况，并对实验现象进行记录，继续进行诱导培养

9 2016年4月 撰写毕业论文

五、主要参考文献

[1] 吉占和. 中国植物志（第19卷）［M］. 北京：科学出版社，1999：117.

[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典［S］. 北京：中国医药科技出版社, 2010：265.

[3] 李娟，李顺祥，黄丹，赵兴兵，蔡光先.铁皮石斛资源、化学成分及药理作用研究进展[J].科技导报，2011, 29(18): 74-79.

[4] 黄勇.铁皮石斛组织培养技术研究进展[J].文山学院学报，2013, 26(6): 14-19.

[5] 洪森荣.“救命仙草”铁皮石斛研究进展[J].生物学教学，2010, 35(11): 6-7.

[6] 王康正，高文远．石斛属药用植物研究进展[J]．中草药，1997, 28(10): 633-635．

[7] 陈晓梅，郭顺星．石斛属植物化学成分和药理作用的研究进展[J]．天然产物研究与开发，2001, 13(1): 70-75．

[8]于晓坤，李德阳，代月，等.贯叶连翘的组织培养和金丝桃素的生产[J].广东农业科学，2013,40(4): 17-19.

[9] Yang JF, Piao XC, Sun D, et al. Production of protocorm-like bodies with bioreactor and regeneration in vitro of Oncidium 'Sugar Sweet'[J]. Sci Hortic, 2010, 125(4): 712-717.

[10]孙丹，朴炫春，郑艳艳，李美兰，廉美兰. 铁皮石斛圆球茎增殖影响因素的研究[J]. 安徽农业科学，2010，38（32）：18150-18151.

[11] Capelle S C, Mok D W S, Kirchner S C, 1983.Effects of TDZ on cytokine in autonomy and the metabolism of N6_(DELTA2_isopentenyl)[8_14C] adenosine in callus tissues of Phaseolus lunatus L[J]. Plant Physiol, 73:796-802.

[12]Murthy B N S, Saxena P K, 1998. Somatic embryogenesis and plant regeneration of Neem(Azadirachta indica A. Juss)[J]. Plant Cell Rep, 17: 469-478.