近年来外源生长激素的发现与广泛应用，植物组织培养技术也同时取得了较快的发展速度。植物组织培养技术不仅仅在理论方面为相关实验提供理论上的支撑，更是成为了大规模无性繁殖快速生产的有效途径。经实践证明，若将细胞培养技术和植物组织培养结合在一起，可以有效加快生产和育种的周期，同普通的培育技术相比有极大的优势[7]。西兰花的组织培养技术有着十分广阔的前景。既可以通过组织培养进行西兰花的快速繁殖，以探究西兰花离体培养的生长发育和分化规律。也可以对愈伤组织中的次生代谢产物进行研究，以筛选出最适合产生萝卜硫素的材料。植物组培技术也是遗传工程改造西兰花品质的重要途径，因此探究西兰花的组织培养技术和问题具有重要意义。

关于西兰花组织培养的研究，国内外均有报道[8-12]。我国最早进行西兰花组织培养研究的是李曙轩，将西兰花不同部位的外植体培养于添加有不同浓度的6-BA及NAA的MS培养基，以诱导愈伤组织[13]。李艳红等采用不同培养基对西兰花的子叶和下胚轴进行分化培养，初步建立了西兰花的离体再生体系，并得到其最适的培养基配方，使其再生频率明显高于芸薹属其它作物[14]。贾秀平等人利用不同浓度2,4-D和NAA对成熟玉米种子不同外植体胚性愈伤组织诱导效果进行了研究，发现一定浓度的2,4-D诱导效果最佳[15]。故本实验通过探索不同浓度的2,4-D和NAA对西兰花不同外植体胚性愈伤组织诱导效果的影响，试图优化西兰花的组织培养体系。

1.材料与方法

1.1实验材料

西兰花种子（蔓陀绿）萌发所得无菌苗，并取不同部位的外植体（根，茎段，叶片）进行诱导。

1.2培养基与溶液

表1MS母液配制

试剂 培养基含量

mg/L 配母液质量（g） ml/L

大量元素

20倍 硝酸钾 KNO3 1900 33 配制1000ml

每升取50ml

硝酸铵 NH4NO3 1650 38

七水硫酸镁 MgSO4.7H2O 370 7.4

磷酸二氢钾 KH2PO4（单独配） 170 3.4

二水氯化钙 CaCl2.2H2O

（单独配） 440 8.8

微量元素

100倍 一水硫酸锰碘化钾 MnSO4.·H2O 16.901 1.69 配置1000ml

每升取10ml

七水硫酸锌 ZnSO4.·7H2O 8.6 0.86

硼酸 H3BO3 6.2 0.62

碘化钾 KI 0.83 0.083

二水钼酸钠 Na2MoO4·2H2O 0.25 0.025

五水硫酸铜 CuSO4.5H2O 0.025 0.0025

六水氯化钴 CoCl2.6H2O 0.025 0.005

铁盐

100倍 EDTA二钠 Na2·EDTA 37.3 3.73 配置1000ml

每升取10ml

硫酸亚铁 FeSO4 27.8 2.78

有机质

100倍 肌醇 Inositol 100 10 配置1000ml

每升取10ml

烟酸

（维生素B3） NC5H4COOH 0.5 0.05

盐酸硫胺素（维生素B1） C12H17CLN4OSHCL 0.1 0.01

盐酸呲哆素（维生素B6） C8H11O3N.HCL 0.5 0.05

甘氨酸 NH2.CN2.COOH 2 0.2

甘氨酸 NH2.CN2.COOH 2 0.2

萌发培养基（pH=5.8）：MS+30g/L蔗糖+7.9g/L琼脂粉

诱导培养基①（pH=5.8）：MS+30g/L蔗糖+3.75g/L结冷胶+NAA（0.1，0.5，1，5mg·L-1）

诱导培养基②（pH=5.8）：MS+30g/L蔗糖+3.75g/L结冷胶+2,4-D（0.1，0.5，1，5mg·L-1）

PBS缓冲液（0.01M,pH=7.4）：称取Na2HPO4·12H2O3.63g，KH2PO40.27g，NaCl8g，KCl0.2g，溶于800ml重蒸水中，用盐酸调pH至7.4，加水定容至1L。

醋酸洋红染液（0.2%）：量取45ml冰醋酸和55ml蒸馏水，煮沸后，缓慢加入2g洋红，边煮边搅拌，煮沸，冷却后过滤。

伊文思蓝染液（0.2%）：称取2g伊文思蓝，溶于100mlPBS缓冲液（0.01M）中。

多聚甲醛固定液（4%）：称取4g多聚甲醛加入200mlPBS缓冲液（0.01M）中，置于磁力搅拌器上搅拌24h，使其溶解。

10%蔗糖溶液：取10g蔗糖溶于100ml蒸馏水中。

20%蔗糖溶液：取20g蔗糖溶于100ml蒸馏水中。