我们做的就是IL-4的基因序列扩增出来, 然后通过重组连接，形成IL-4-pcDNA3.1(-)-Fc重组质粒转化进质粒表达菌株中，获得了可以表达IL-4-pcDNA3.1(-)-Fc重组质粒，为表达出IL-4目的蛋白提供材料，也可对制备获得的抗体进行多种检测，通过尝试应用IL-4抗体进行免疫组化研究[18-20]，从而对IL-4蛋白的体外研究提供线索。

2实验材料

2.1菌株和质粒载体

哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1(-)-Fc、用于制备感受态的大肠杆菌XL-10（本实验室保存、IL-4基因序列由赛百盛公司合成。

2.2主要试剂及试剂盒

表1主要试剂及试剂盒

试剂名称 来源

限制性内切酶BamHⅠ TaKaRa 生物科技公司

限制性内切酶Xhol Ⅰ TaKaRa 生物科技公司

10×Cutsmart TaKaRa 生物科技公司

DL5，000Maker TaKaRa 生物科技公司

2.5 mmol/L dNTPs TaKaRa 生物科技公司

rTaq酶 康为世纪生物有限公司

Pfu酶 康为世纪生物有限公司

T4DNA连接酶 NEB 生物技术公司

质粒小提试剂盒 天根生物有限公司

琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 天根生物有限公司

PCR产物纯化试剂盒 天根生物有限公司

2.3主要仪器及耗材

表2主要仪器及耗材

仪器名称 仪器来源

摇床 天津市欧诺仪器仪表有限公司  

制冰机 SANYO Electric Co.Ltd.JAPAN

雷磁PHS-2F PH计 上海精科仪器技术有限公司

PCR仪 美国ABI公司

DYY-12电泳仪和水平式电泳槽         北京市六一仪器厂

凝胶成相系统   北京君意东方电泳设备有限公司

DK-8D型电热恒温水槽 上海精宏实验设备有限公司

HZT-A500电子天平 福州华志科学仪器有限公司

DSX-280B 高压灭菌锅   上海申安医疗器械厂

1-14 小型台式高速离心机 德国SIGMA公司

SW-CJ-IF 单人超净工作台 苏州净化设备有限公司

Milli-Q Biocel超纯水器 美国Millipore公司

THZ-320型恒温振荡器 上海精宏实验设备有限公司

恒温培养箱 GNP-9050 上海精宏实验设备有限公司

2.4主要材料以及溶液的配制

（1）LB液体培养基；称取酵母提取物（YEAST EXTRACT）0.5g，胰蛋白胨（TRYPTONE）1g,NaCl1g,加去离子水，溶解质100ml,高压灭菌。

（2）LB 固体培养基：称取琼脂粉1.5 g，胰蛋白胨 1 g，NaCl 1 g，酵母提取 物 0.5 g，添加 100 mL 超纯水，121℃，高压灭菌，置于 4℃储存。

（3）1.2%琼脂糖凝胶：称取0.6g琼脂糖，量取40ml 0.5×TAE缓冲液于三角瓶中，用称量纸盖住瓶口，防止水分蒸发，用微波炉加热，在溶解过程中要时不时地拿出来摇晃三角瓶，使其至少沸腾三次，直到观察不到透明晶体，证明琼脂糖已溶化均匀，温度降至60℃左右，摇匀，倒入制胶模具中，加入EB染料，快速混匀，要避免产生气泡，如果有气泡产生，用枪头把气泡赶到边缘部位，20min后把胶从制胶模具中取出备用。

（4）氨苄青霉素储存液（100mg/ml）：将0.1gAmpicillin粉末于1ml超纯水中，完全溶解，过滤除菌，于-20℃保存。

（5）含100µg/ml Amp 的LB 培养基：向100mlLB液体培养基中加入100µl已经配好的浓度为100mg/ml的Amp储存液，摇晃混匀，其终浓度为100µg/ml

（6）2×TSS：用电子天平称取PEG8000 10g、MgCl2·6H2O 10.2g,量取5mlDMSO,并添加LB液体培养基至总体积达到50mL，121℃，高压蒸汽灭菌15-20min，置于4 ℃储存。

   （7）50%甘油：量取甘油和超纯水各10mL，混匀，121℃，高压灭菌，放于4℃储存。

（8）50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液：准确称量242 gTris碱，18.6 g EDTA2Na，加入 57.1 mL冰乙酸于1000mL烧杯中，加入适量超纯水，溶解后将体积调整到1L，调节pH 8.0，室温储存。