在之前的研究中，有人发现MAPK级联途径具有重要意义，它参与植物的生长发育，细胞死亡等过程。随着粮食、能源、和环境等问题日益突出和严重，人们更加注重对植物抗逆性等方面的研究。MAPKS途径有不同的调控方式，如转录水平，磷酸化状态等，不同条件下会启动不同的调控方式。MAPK级联途径是一种信号传导模式，它在真核生物中普遍存在。最少有三类蛋白激酶含于MAPK链中，即MAPKKK、MAPKK、MAPK这三种组成，胞外信号通过MAPK级联途径中各成分的依次磷酸化作用传递给下游作用因子，并调控细胞的发育，生长，抗性等过程中的效应分子。Gateway克隆技术其实原理并不难，它只是在特异位点进行DNA重组的一项技术，它把各种载体的技术平台都整合到一块了，这样一来也就克服了构建载体的各种缺陷，这是传统的酶切与连接的方法所不能够做到的。它的优点远不止这些，能够将基因高效率的克隆到，一个或者是多个与和Gateway克隆技术相兼容的载体系统中。

本实验根据提供的序列设计引物通过PCR获得MPKK5的片段，经纯化后获目的基因，利用Gateway技术，构建植物表达载体35ss-MPKK5-3xHA为进一步研究SlMPKK5的各种代谢调控功能奠定基础。

1.材料与方法

1.1实验材料

1.1.1菌株

大肠杆菌Trans5α感受态细胞由周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室提供。

1.1.2质粒载体

引物K-531周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室提供

引物K-105周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室提供

pDONR207周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室提供

35ss-GW-3HA周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室提供