2.3抗体的中和活性检测

2.3.1包被96孔圆底细胞培养板

PBS稀释CD3至1μg/mL包被96孔圆底细胞培养板中100μL/well 4℃过夜。

2.3.2摸索PD-L1蛋白包被的最佳浓度

设置9个PD-L1蛋白浓度分别是10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078125μg/mL，等量加入到鼠脾脏细胞中，CO2培养箱孵育48h后观察PD-L1蛋白对鼠脾脏细胞的抑制效果。PBS洗涤96孔板2次，PBS稀释鼠PD-L1蛋白至合适浓度包被96孔板 100μL /well 37℃ 孵育2h。

2.3.3分离小鼠T淋巴细胞

将两只小鼠脾脏放入300目筛子上，用研磨棒研磨碎，收集于培养皿中，并用1640+10％FBS冲洗干净。1300r/min离心10min，弃去上清，5mL 1640+10％FBS 重悬细胞，过筛去掉杂细胞碎片，加入2mL 1640+10％FBS再次重悬细胞，1300r/min离心10min，弃上清，得到纯净的脾脏细胞。

免疫磁珠法分离细胞的基础是细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单克隆抗体相结合，在外加磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单克隆抗体结合而没有磁性,不在磁场中停留,利用这个原理使不同细胞分离开。