分别另取试管3支，并且每支试管盛有9mL的无菌水，分别用记号笔在写上10-2、10-3、10-4。把已经稀释成10-1的土壤液，充分震荡，然后静置0.5分钟，用移液枪吸1mL的土壤悬液打入记号为10-2的试管中，并在试管内轻轻反复吹打几次，这样就混合的比较充分了，就得到了10-2的稀释液了。用和上面一样的方法从10-2的试管中吸1mL稀释液打入写有记号是10-3的试管中，混匀的比较充分后就是10-3的稀释液，然后用同样的方法就可以得到10-4的稀释液了。

1.3.1.3 涂布平板与划线接种

取一支灭过菌的枪头，由低浓度开始，用移液枪从各浓度的土壤稀释液中吸100uL，分别打入已经用记号笔标注好稀释度的牛肉膏蛋白胨培养基平板上，然后涂抹匀称。每个浓度做两个平板。37℃下恒温培养24h。

在超净工作台中，从上述稀释度不同的培养基中用无菌枪头分别挑取不同形态的单菌落来划线，先在培养基的一侧平行划线4条左右，然后旋转一下大概是90°的角，然后更换一个灭菌枪头，进行第二次的平行划线，然后再转动约90°的角，用同样的手法来做第三次的平行划线，仿造此种方法来作第四次的划线。等划线都结束后，把盖子盖上，倒过来在28-29℃的条件下培养。

1.3.2 菌种的活化

将制备好的LB培养基均匀分装到若干的试管中，用棉花塞，塞住试管口，然后灭菌，待结束后，冷却后贴上标签备用，然后取两只试管，在超净工作台中用灭菌枪头挑取单菌落接种到LB培养基中，并且拿一个没有接种的LB培养基作为对照，用于鉴别LB培养基是否被污染和菌种是否被活化，然后将试管倾斜一起放入振荡器中，把水温设置为37℃，转速设置为150r/min的条件下，进行活化培养。

1.3.3 刚果红染色筛选

   将活化的菌种，用点样的方法接种到筛选培养基上，并且做上标记，倒过来培养48h后，随后加入一定量的刚果红溶液，染色达到1h后，去除染液后，加入一定量的1mol/L的NaCl溶液来脱色1h。最后可以看透明圈的大小或者透明圈菌落的直径比值来选取菌株。