1材料与方法

1.1材料与试剂

1.1.1 动物

   C57BL/6老年雌性小鼠 19只，体重25g～30g，月龄为7月鼠，由周口师范学院六楼转化生物学国际联合实验室--神经生物学与转化医学研究所所提供。  

1.1.2药物试剂

   A 银杏叶片，扬子江药业集团有限公司制药，每片规格40mg，含总黄酮醇苷9.6mg，萜类内酯2.4mg。

B 地西泮，太原市振兴制药有限公司，规格：2.5mg。

C 吐温80

D 70％无水乙醇

1.2主要仪器设备

电子天平

Coulbourn Instruments牌子的明暗箱

明暗箱实验设备包括左右两个同等大小（32.3cm*22.9cm*21.3cm）的隔室（compartment）。其中一隔室为不透明的黑色挡板，形成暗箱（主动回避可不用暗箱）。两隔室之间由一个拱形门（8.9cm*11.4cm）相联，门可由实验者根据实验需要关上或打开。隔室地板为不锈钢栅栏（直径：小鼠3.175mm）。

1.3方法过程

1.3.1 动物的处理

根据分层随机区组设计原理分组，在实验前对小鼠进行了体重的测定，结果表示没有显著的体重差异。因此将19只小鼠进行随机分配，分为3组：control组（7只）、GBE组（6只）、DZP组（6只）。其中control组为空白对照组，用蒸馏水喂养；GBE为实验组，用GBE溶液喂养；DZP为阳性对照组，用DZP溶液喂养（有研究表明[7]，地西泮具有显著的抗焦虑，和消除记忆的作用，因此以地西泮为阳性对照，凸显实验结果）。

实验鼠分组过后，对其进行给药处理10天，在给药期间测量每天的饮水量、体重变化做记录，在后几天外加测量饮食量的变化。给药处理过后，对各组进行行为学的测试:明暗箱实验(1ight—dark box，LDB)[8]。

1.3.2试剂的配制

   银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,GBE)

   取10片银杏叶片剂置入研钵后加吐温80（吐温80为助容剂），边研磨边加100ml蒸馏水稀释，保持终溶液中吐温80浓度小于l％。蒸馏水中加入同比例吐温80，配制浓度为4mg/ml的溶液，终溶液为透明澄清液体，肉眼无难容颗粒。因为GBE溶解性差，所以在给药之前充分摇匀，而本实验采用的是口服，因此需要经常性的对其进行摇匀以免较大的误差出现。

   地西泮（Diazepam,DZP）

同GBE 一致，地西泮不易溶于溶液，所以同样在研钵中加入吐温80，取两片药片边研磨边加60ml蒸馏水稀释，保持终溶液中吐温80浓度小于1%，配制浓度为0.083mg/ml的溶液。直至溶液逐渐变的透明清澈，无肉眼可见的颗粒，给药前充分摇匀，以免出现不必要的误差。

1.3.3 实验过程

对小鼠进行实验处理前，每天不断的对其进行抚摸接触,使其更加熟悉实验者、熟悉实验室环境，避免其在实验过程中过于焦虑，影响实验结果。每天进行给药期间的数据测定时间为下午17:00，进行行为学测试时在晚上19：00左右进行测定。实验室温度保持在22±3℃，湿度60%-70%左右。      

给药结束后进行实验，测定时以一个小鼠为单位，放在一个干净的饲养盒子进行测定。并且采用组组之间的交叉测试，减少误差。根据小鼠的生活习性，选择晚上测定行为学。采用明暗箱实验来进行小鼠的焦虑行为测定。在实验进行之前，先将小鼠放置到暗箱中适应1min，随后打开中央隔板的小门,此时开始记录小鼠在暗箱中所待的时间，当小鼠进入明箱箱后立即开始计时小鼠在明箱中的时间，并记录下小鼠的穿梭次数。其余小鼠按照此方法进行实验测试，在每完成一个小鼠后，用70%的酒精进行擦拭，用以消除前一个小鼠留下来的气味，减少误差。

统计分析：采用PrismDemo5软件进行统计作图分析。将数据输入Microsoft Excel加以计算、整理、保存，其结果用平均值 ± 标准误（Mean ± S.E.M）表示。统计学作图软件采用Prism 5.0版。单因素多组数据间的差异用单因素方差分析（one-way ANOVA）并继之以Tukey's Multiple Comparison post-hoc test；两组数据间差异用非配对T检验分析（unpaired T-test）。