本实验采用简便的旷场实验（Open field）来测定银杏叶提取物（GBE）对小鼠学习记忆的改善，通过自主活动计数法来探究GBE对小鼠刻板行为的改善。此实验研究能为以后的神经系统疾病的治疗和医药研究提供一些理论性的基础，而且也能为有关医学方面的临床治疗提供理论性的依据[8]。

1 材料与方法

1.1材料来源

1.1.1 动物

C57BL/6小鼠 14只（雄性），体重25g左右，月龄为7月鼠，由周口师范学院六楼神经生物学与医药转化研究所提供。

1.1.2药物

A 银杏叶片:扬子江药业集团有限公司制药，每片含总黄酮醇苷9.6mg，萜类内酯2.4mg。

B 地西泮片:太原市振兴制药有限公司，规格：2.5mg。

C 无菌水:由周口师范学院二楼重点实验室提供。

D 75 %无水乙醇:由周口师范学院六楼神经生物学与医药转化研究所提供。

1.1.3 仪器

旷场分析仪器：自发活动 Video Tracking for Locomotor Activity 开口的黑色木盒（内部场地大小为81 cm × 81 cm，高28 cm。盒底漆成纵横各3条白线（宽3 mm），从而形成16个等大的方格（每格大小20 cm × 20 cm），计时器，干、湿抹布等。

电子天平:小鼠行为学检测系统，型号：Tru Scan

1.2 药物配制

1.2.1 银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,GBE)

第一次在进行实验准备期间我们对小鼠的日饮水量进行了测定，结果显示小鼠的日饮水量为5ml，因此我们配置的GBE浓度为4mg/ml、地西泮为0.083mg/ml。具体操作为取十片银杏叶片剂置入研钵后加吐温80（吐温80为助溶剂），由于银杏叶提取物（GBE）难溶于溶液必须边研磨边加蒸馏水稀释，始终保持终溶液中吐温80浓度小于l％。蒸馏水中加入同比例吐温80，加入无菌蒸馏水配置共200ml溶液。终溶液为透明澄清液体，肉眼无难容颗粒。因为GBE溶解性差，所以在给药之前充分摇匀，而本实验采用的是口服，因此需要经常性的对其进行摇匀以免较大的实验误差出现。如果药品溶液用完，重复第一次配药过程，提供小鼠的饮用，以利于实验的进行。其中配药方法以上药粉(银杏叶提取物片剂压制成粉)电子天平称取，置入研钵后加吐温80，边研磨边加蒸馏水稀释，保持终溶液中吐温80浓度小于l％。蒸馏水中加入同比例吐温80。吐温80为助容剂，终溶液为透明澄清液体。肉眼无难容颗粒。 银杏叶提取物溶解性稍差，溶解后磁力搅拌为均匀悬浮液，给药前再次混匀，肉眼无见瓶中明显沉淀。

1.2.2 地西泮（Diazepam,DZP）

同GBE 一致，第一次取地西泮六片放置于研钵后加吐温80（吐温80为助溶剂）由于地西泮不易溶于溶液，所以同样在研钵中加入吐温80，边研磨边加蒸馏水稀释，始终保持终溶液中吐温80浓度小于1%，加入无菌蒸馏水配置共180ml溶液。直至溶液逐渐变的透明清澈，无肉眼可见的颗粒，给药前充分摇匀，以免出现不必要的实验误差。如果药品溶液用完，重复第一次配药过程，提供小鼠的饮用，以利于实验的进行。

1.3 小鼠分组与实验处理方式

根据分层随机区组设计原理分组，在实验前对小鼠进行了体重的测定，结果表示没有显著的体重差异。因此将14只小鼠进行随机分配，分为3组：对照组（4只）、对照组组为空白对照组，用蒸馏水喂养；GBE组（6只）、GBE为实验组，用GBE溶液喂养；地西泮组（4只）、地西泮为阳性对照组，用地西泮溶液喂养；（有研究表明[2]，地西泮具有显著的抗焦虑，和消除记忆的作用，因此以地西泮为阳性对照，凸显实验结果）。

实验鼠分组过后，对其进行给药处理12天，在给药期间测量每天的饮水量、及对体重变化做记录，并在后几天外另加测量饮食量的变化。给药处理过后，对各组小鼠进行行为学的测试: 1.自主活动的计数 ( 刻板行为 )，包括有直立次数、自我梳理次数 、刨地次数、自我梳理时间时间、刨地时间；2. 旷场实验（Open field）每只小鼠接受一次测试，将小鼠面朝墙放入4个拐角方格之一，并让其自由探索环境15 min。可有两名实验人员合作，分别坐在木盒的其中两角。其中一人负责计数跨越方格的总数，另一人负责计时，包括边缘距离（Margin distance）、边缘时间（Margin time）、中心距离（Center distance）、中心时间（Center time）、进入中心的次数（Center entries）、周边时间、抬腿次数,最后再观察大便颗粒数。