鉴于此，本研究尝试以银杏叶提取物作为研究对象，通过小鼠实验，观察其是否具有抗疲劳功效，以期为抗疲劳食品与药物的开发提供科学依据。

1 材料和方法

1.1实验动物

雄性小鼠  健康，游泳能力正常   由周口师范学院神经生物学与转化医学研究所提供。

1.2材料与试剂

银杏叶提取物片（市售），每片含有银杏叶提取物40mg，其中银杏黄酮苷9.6mg，萜类内脂2.4mg。丙二醛（MDA）试剂盒、血尿素氮（BUN）试剂盒于南京建成生物工程研究所购置；

标准葡萄糖液（0.05mg/ml）、蒽酮试剂、浓硫酸、冰醋酸、吐温80、无水乙醇等由周口师范学院神经生物学与转化医学研究所提供。  

1.3仪器与设备

HWS12型电热恒温水浴锅         上海恒科学仪器有限公司；

XK96-A快速混匀器               江苏新康医疗器械有限公司；

电子天平AR224CN               上海奥豪斯仪器有限公司；

723可见光分光光度计            上海元析仪器有限公司；

台式低速离心机                  中国江苏金坛市医疗仪器厂；

微量移液管、玻璃试管等由周口师范学院神经生物学与转化医学研究所提供。

1.4 实验方法

1.4.1小鼠的饲养与分组

将12只雄性小鼠按体重随机分成处理组和对照组，每组6只，3只/笼，并打上耳号。对小鼠采用常规饲养，在23℃左右室温下，相对湿度为55%左右时，让其自由摄取水及饲料。将小鼠按体重随机分成处理组和对照组，每组6只，并打上耳号。

处理前，测定小鼠日水量，结合小鼠体重，将银杏叶提取物片研磨成粉末状，溶于蒸馏水中，加入少量的吐温80（起帮助溶解的作用），根据64.8mg/day/kg（小鼠体重）标准，配制一定浓度的银杏叶提取物液，对处理组小鼠进行每天喂食。对照组饮水中不加银杏叶提取物片，正常饮食。

1.4.2小鼠血清和组织的分离与提取

小鼠喂养处理期间给小鼠在含有温度为25℃的容器中进行2次适应性游泳，4周后，在小鼠的尾部绑上小鼠体重5%的负重物的情况下对小鼠进行一次性竭力游泳实验，小鼠力竭标准为小鼠头部淹没水中8秒不能自主浮出，记录力竭游泳时间。然后挖眼球取血，从血液中分离到的血清。立即对小鼠解剖，并取出肝脏组织，肌肉组织，用0.9%NaCl溶液洗去附着的血液并用滤纸吸干。置于液氮中临时保存，后置于-70℃冰箱中保存备用。

1.4.3 小鼠的采食量与体重测定

实验期间每周记录小鼠的采食量，比较处理组和对照组平均每日采食量变化。实验起始时称量小鼠体重，每隔一周称量一次并记录数据，力竭负重游泳前称量为最后一次，并据以此次体重计算游泳负重的铁丝质量。

1.4.4小鼠竭力游泳时间的测定

对小鼠进行一次性力竭负重游泳，将对照组和处理组小鼠按照负重5%（小鼠体重）的铁丝固定在小鼠尾部，然后在25℃水温下水深50cm的透明游泳容器中进行一次性力竭负重游泳，用计时器测定游泳时间，并记录数据。力竭判定标准：小鼠下沉水面后8s未浮出。

1.4.5血尿素氮（BUN）含量测定

采用血尿素氮（BUN）试剂盒方法测试，即二乙酰肟法。二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4 5-二甲基-2-氧咪唑化合物颜色深浅与尿素含量成正比。因二乙酰不稳定故由试剂中二乙酰一肟与强酸作用产生二乙酰。