学习记忆是人类从出生开始一直不可或缺的一种极为复杂的神经活动。学习是在置身于一陌生的环境中时,神经系统用以适应此环境接受新事物所作出的一
学习记忆是人类从出生开始一直不可或缺的一种极为复杂的神经活动。学习是在置身于一陌生的环境中时,神经系统用以适应此环境接受新事物所作出的一系列的神经活动,记忆则是在学习、接受此陌生环境后,大脑对其所获得的经验进行保持和再现的一种神经活动,因此学习与记忆的两种神经活动具有一定的联系。所以可以简单来说它主要包括有3个阶段:获得、巩固、再现。但是随着年龄的增长,神经系统也在渐渐的受到某些机制的损伤,至此学习记忆的功能会随着年龄的增长而不断下降[10]。而且对于科技发达21世纪来说,人口的老龄化的现状会使得越来越多的人遭受记忆力减退的困扰,因此对于此现象的治疗研究深受广大研究者者的关注。早期的治疗研究仅仅只集中于副作用极大的西药研究,而渐渐地中草药由于其具有毒副作用小、疗效快的特点而深受研究者喜爱。例如五味子[11]、银杏叶提取物等等。
因此针对于长时间国内外对银杏叶提取物的药理研究,本实验采用简便的明暗箱被动逃避实验(Passive Avoidance)来观察银杏叶提取物(GBE)对小鼠学习记忆的改善效果,且通过自主活动计数法来简便的观察GBE对小鼠刻板行为的改善。为以后的神经系统疾病的治疗医药研究提供一定的理论性基础。
1 材料与方法(Materials and methods)
1.1材料来源
1.1.1 动物 ( Animals )
C57BL/6小鼠 14只(雄性),体重30g±3g,月龄为7月鼠,由周口师范学院六楼转化生物学国际联合实验室--神经生物学与转化医学研究所提供。
1.1.2药物
A 银杏叶提取物片剂(EGb 761)
由德国威玛舒培博士药厂生产,规格:40mg/片,其中银杏黄酮苷9.6mg,萜类内酯2.4mg(银杏内酯、白果内酯),
B 地西泮
太原市振兴制药有限公司生产,规格:2.5mg/片。
C 吐温80 75%乙醇 生理盐水
1.1.3 仪器
明暗箱(Lit-Dark box),Coulbourn Instruments
仪器由两个大小相同的均为玻璃材质的明箱、暗箱所组成(18.2cm×19cm×32.7cm),明箱为实验鼠的起始位置,在进行实验时,将小鼠从明箱中进入到暗箱中的时间记录为实验指标。两箱间用隔板隔开,且隔板底部有一闸门,通过电源开关控制其开或闭。在箱子底部有一电板,用于给老鼠以电击实验来测定小鼠的学习记忆功能。本实验仪器配置有控制电击于暗门的仪器,通过人工记录来测定实验数据。如下图:
图1:A为明暗箱被动逃避实验(Passive Avoidance)的实验仪器;B为配置的电击仪器和闸门电动开关。
1.2 药物配制
在进行试验准备期间我们对小鼠的日饮水量进行了测定,结果显示小鼠的日饮水量为5ml,因此本实验我们配置的GBE浓度为4mg/ml、地西泮0.083mg/ml
1.2.1 银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,GBE)
根据所计算出来的GBE溶液浓度,取十片银杏叶片剂置入研钵后加吐温80(吐温80为助溶剂),边研磨边加蒸馏水稀释,保持终溶液中吐温80浓度小于l%、体积为100ml。蒸馏水中加入同比例吐温80。终溶液为透明澄清液体,肉眼无难容颗粒。因为GBE溶解性差,所以在给药之前充分摇匀,而本实验采用的是口服,因此需要经常性的对其进行摇匀以免较大的误差出现。
1.2.2 地西泮(Diazepam,DZP)
同GBE 一样,地西泮不易溶于溶液,所以取10片地西泮放置入研钵后同样加入吐温80,边研磨边加蒸馏水稀释,保持终溶液中吐温80浓度小于1%、体积为300ml。直至溶液逐渐变的透明清澈,无肉眼可见的颗粒,给药前充分摇匀,以免出现不必要的误差。
1.3 小鼠分组与实验处理方式