摘  要：本文克隆了拟南芥锌指蛋白基因Zat12，通过浸花法转化拟南芥，得到Zat12转基因拟南芥。Zat12基因的过量表达增强了拟南芥对盐的抗性，而木霉诱导进一步增强了对盐胁迫的抗性。

关键词：拟南芥；Zat12；木霉；诱导；抗盐性

Cloning of Zinc Finger Protein Gene Zat12 of Arabidopsis thaliana and Salt Resistance Improving of Transgenic A. thaliana Induced by Trichoderma

Abstract: In this study, we cloned zinc finger protein gene Zat12 of Arabidopsis thaliana, then Zat12 was transfored into Arabidopsis thaliana by the method of floral dip. It was showed that Zat12 overexpression increased the resistance to of transgenic plants salt, and the resistance to salt stress was further improved after Trichoderma induction.

Key words: Arabidopsis thaliana; Zat12; Trichoderma; Induction; Salt resistance

目    录

摘  要 1

引言 1

1. 材料与方法 2

1.1材料 2

1.1.1植物材料和菌株 2

1.1.2培养基 3

1.1.3主要仪器 3

1.2方法 3

1.2.1 WT拟南芥的培养基种植 3

1.2.2 WT拟南芥的移栽 3

1.2.3 Zat12基因的克隆 4

1.2.4植物表达载体构建 4

1.2.5 Zat12- pROKII重组质粒转化农杆菌GV3101 4

1.2.6浸花法转化拟南芥 5

1.2.7 Zat12转基因拟南芥的获得 5

1.2.8木霉菌株的活化 5

1.2.9木霉菌株的液体培养 5

1.2.10 Zat12转基因拟南芥的木霉处理 5

1.2.11 Zat12转基因拟南芥的盐胁迫处理 5

1.2.12 Zat12转基因拟南芥叶片组织化学染色 6

1.2.13 Zat12盐胁迫下转基因拟南芥生长指标测定 6

1.2.14 Zat12盐胁迫下转基因拟南芥生理指标测定 6

2. 结果与分析 6

2.1 Zat12基因的克隆 6

2.2植物表达载体构建 7

2.3 Zat12转基因拟南芥的获得 8

2.4木霉诱导后，盐胁迫对Zat12转基因拟南芥ROS积累的影响 8

2.5木霉诱导后，盐胁迫对Zat12转基因拟南芥长势的影响 9

2.5.1木霉诱导后，盐胁迫对Zat12转基因拟南芥生长形态的影响 9

2.5.2木霉诱导后，盐胁迫对Zat12转基因拟南芥生长指标的影响 10

2.6木霉诱导后，盐胁迫对Zat12转基因拟南芥生理指标的影响 11

2.6.1木霉诱导后，盐胁迫对Zat12转基因拟南芥抗氧化酶活性的影响 11

2.6.2木霉诱导后，盐胁迫对Zat12转基因拟南芥叶绿素含量的影响 12

2.6.3木霉诱导后，盐胁迫对Zat12转基因拟南芥渗透调节物质的影响 13

2.6.4木霉诱导后，盐胁迫对Zat12转基因拟南芥细胞损伤的影响 14

3. 结论与讨论 15

3.1拟南芥锌指蛋白Zat12的克隆 15

3.2木霉诱导减少了盐胁迫造成的ROS在Zat12转基因拟南芥中的积累 15

3.3木霉诱导减弱了盐胁迫对Zat12转基因拟南芥长势的影响 16

3.4木霉诱导后，盐胁迫对Zat12转基因生理指标的影响 16

3.4.1木霉诱导后，盐胁迫对Zat12转基因拟南芥抗氧化酶活性的影响 16

3.4.2木霉诱导后，盐胁迫对Zat12转基因拟南芥叶绿素含量的影响 16

3.4.3木霉诱导后，盐胁迫对Zat12转基因拟南芥渗透调节物质的影响 17

3.4.4木霉诱导后，盐胁迫对Zat12转基因拟南芥细胞损伤的影响 17

参考文献 17

致谢 20

拟南芥锌指蛋白基因Zat12的克隆及木霉诱导转基因拟南芥的抗盐性提高

引言

干旱、高盐和低温等是植物在生长中经常遇到的非生物逆境，极大影响植物的生长发育，每年会造成世界粮食作物的大量减产[1]。植物在这个复杂而充满敌意的环境中生存，已经进化出一系列诱导防御机制使他们能够产生防御反应以适应这种生存环境。其中，植物的锌指蛋白转录因子在植物生长和抗逆性方面具有重要意义。

锌指蛋白（zinc finger protein）是一类具有手指状结构域的转录因子，最初于1983年在非洲瓜蟾（Xenopus laevis）卵母细胞的转录因子TFⅢA中被发现[2]，广泛分布在动植物和微生物中。目前已在拟南芥（Arabidopsis thaliana）、小麦（Triticum aestivum）、水稻（Oryza sativa）、大豆（Glycine max）、棉花（Triticum aestivum）等植物的研究中发现，锌指蛋白在植物生长发育中具有重要作用。