OD600 OD 值为 600 时的吸光度

OD510 OD 值为 510 时的吸光度

1 绪论

苯酚（Phenol，C6H5OH）,又叫石炭酸、羟基苯，属芳香环类物质[1]。苯酚不是酸，但具有弱酸性。苯酚主要用于生产高分子化合物，如：树脂，纤维、橡胶、塑料、油漆等，应用范围广泛，涉及到工、农业、油田工业以及医药业等多个领域。此外，它最早是在煤油的提炼过程中被发现的，后面经过化学研究表明：苯酚的结构稳定，很难降解。苯酚能损坏蛋白质的空间结构，因此具有毒性和腐蚀性，如：损害人体内脏和神经，对腐蚀人体表皮和粘膜。一般而言，口服苯酚1.3g就有致死的可能。但是，由于人类生产活动，苯酚多是以含酚废水的形式，使水体中能被微生物利用的氧气含量减少，从而影响水生生物的生活方式，进而通过食物链影响生物圈。近年来，苯酚逐渐成为主要的化学污染物，超标排放含酚废水会污染环境，根据 《污水排入城镇下水道水质标准》CJ343-2010 的规定,综合标准必须达到1mg/L或者0.5mg/L[2]。治理苯酚污染的方法有很多：如：物理吸附法、物理蒸馏法、化学氧化法、化学萃取法和生物降解法等[3]。但是，目前的众多生化和物理方法在处理苯酚水质污染的过程比较复杂、投资大、易形成新的污染物。

近年来，为寻找到高效、迅速和低成本的除酚方法，逐渐在微生物降解途径中有所突破。研究表明，很多微生物对苯酚具有降解的能力，苯酚甚至能完全充当此类微生物的碳源，供微生物生长利用，并且不会产生有害中间产物而造成二次污染[4]。微生物在处理含酚废水方面具有极高的潜力，不仅具有绿色环保的优点，还具有低成本、操作流程简单等优势。研究表明，具有降解苯酚能力的微生物主要有假单胞菌(Pseudonomonas)、芽孢杆菌(Bacillus)、酵母菌、根瘤菌(Rhizobia)、放线菌以及真菌等。这些已经发现的具有苯酚降解能力的菌株，其降解效率参差不齐，部分假单胞菌属(Pseudonomonas.sp)的菌株降解苯酚浓度高达几千 mg/L，但其中大部分的菌株对苯酚降解能力都局限于1.0 g·L-1以下[5]。目前，苯酚降解菌的分离主要来源于被工业污染的淡水水体、河底污泥和油田附近的土壤中，而在一些特殊环境中（如海洋）分离相关菌株的研究比较少。而且，传统的苯酚降解菌分离的方法过于单一，不易得到苯酚降解能力突出的优势菌种。近年来，为最大效率降解苯酚污染物，有关苯酚降解菌降解特性的研究很多，但由于苯酚降解效率高的菌种较少，而影响苯酚降解的因素复杂多样，使得苯酚降解菌的降解特性尚不明确。

本研究从长江入海口水体中以苯酚为唯一碳源分离、筛选得到一株苯酚降解菌。在实验室条件下，对该菌种进行富集培养，纯化菌种，并根据4-安替比林分光光度法测定苯酚的降解效率[6]。然后，通过 PCR 技术对细菌 16S rRNA  基因序列进行扩增，再构建系统发育树分析同源性[7]。最后测试pH、温度等环境因素对苯酚降解特性的影响，从而为后续苯酚污染废水的微生物修复研究提供前期基础[8]。

2 材料与方法

2.1材料

2.1.1 菌株来源

样品于2016年采集自连云港入海口（经纬度：34 ° 39 ” N，119 ° 28 ” E），从采样点共采集了四份样品，每一份的重量（湿重）都在200 g 以上，装在采样袋中，编号并迅速将样品置于冷藏箱内保存，带回实验室后一周内完成分离。

2.1.2 培养基

（1）LB 培养基

胰蛋白胨 10.0 g、酵母浸出粉 5.0 g、NaCl 10.0 g,于烧杯中加入去离子水搅拌溶解，并定容至1 L,调节pH 至7.0左右，115 °C高压蒸汽灭菌30 min。

（2）无机盐（Marine Mineral Culture ）培养基