5、 壳聚糖酶菌种的选育

要达到获得高产的壳聚糖酶的目的，除了通过对产壳聚糖酶菌株的基因进行分析，运用分子克隆等方法，以实现重组菌壳聚糖酶的高效表达外，还可以从自然界中筛选产酶活性较高的微生物菌种，而后筛选并优化最佳酶促反应条件[24]。

目前各实验室[8-16]已从细菌如：Enterobacter、Nocardioides、Myxobacter、Aporocytopage、Artyrobacter、Bacillus Streptomyces中，真菌如：Asper-gillus、Rhizopus、Aspperrgillus、Penicillum、Chaetomium和Basidiomycete中，病毒如：chlorellavirusPBCV-1、CVK-2等中发现壳聚糖酶的存在，并已从发酵液中纯化得到壳聚糖酶。大多数微生物的壳聚糖酶是一种诱导酶,在细胞的正常代谢活动中，微量合成或不合成，在适当的底物存在下，壳聚糖酶会大量合成[16]。从已报道的的研究中可知，一般制备壳聚糖酶均采用微生物液体培养发酵的方法。首先在平板上分离菌种初筛，后于摇瓶培养复筛，最后检测筛选出的产壳聚糖酶菌株，选出产酶活性最高的菌株用来探究最佳产酶条件[16]。此外，通过诱变处理来获得高产酶量的突变菌株也是可行的。王艳等[12]出发菌株选用假单胞菌Y8.0,分别使用3种诱变方法进行处理，结果显示紫外线的诱导效果优于亚硝基胍、60Co，其突变株的稳定性较高，产酶活力约提升了6倍。

此次实验，我们利用基因工程手段，将带有壳聚糖酶基因的重组质粒（pET28a-inaQN-Csn）导入大肠杆菌BL21中，并诱导其表达在大肠杆菌BL21细胞表面，初步设计不同的诱导条件，利用软件分析不同条件得到的壳聚糖酶蛋白浓度，根据蛋白浓度大小判断优化条件。