摘要:本研究对周口地区田间番茄根腐病菌进行分离纯化，通过形态学观察、DNA提取、核糖体DNA转录间隔区（ITS）克隆、测序和系统发育树分析该病原菌，利用36种真菌培养基对该病菌最佳生长培养基进行筛选，采用茄科不同植物对其致病力进行检测，结果表明，ITS测序及进化树分析确定该病菌为茄病镰刀菌，且该病菌与河北省分离的镰刀菌同源性达到99%，最适合番茄根腐病菌生长的培养基为PDA，该病原菌对龙葵的致病力最强，本研究为番茄根腐病的抗病育种奠定了理论基础。

关键词: 番茄根腐病；形态学观察；茄病镰刀菌；系统发育树；筛选

Isolation and Identification of Tomato Root Rot Pathogen and Screening of Culture Medium and Detection of Pathogenicity

Abstract：Tomato Root Rot Pathogens were isolated and purified in Zhoukou region, which was analyzed by morphological observation, DNA extraction, ribosomal DNA internal transcribed spacer (ITS) cloning, sequencing and phylogenetic tree. 36 various kinds of fungi medium were selected to screen optimal growth medium of the fungus and different solanaceae plants were used to detect its virulence. The results showed that the stains isolated was identified as Fusarium solani by ITS sequencing and phylogenetic tree, for the Fusarium stains isolated from Hebei Province had 99% homology with our strains. The most suitable growth medium for tomato root rot fungus was PDA, and the most susceptible host of the pathogen was Solanum nigrum, which laid the theoretical foundation for the rot of tomato breeding for disease resistance.

Key words: Tomato root rot; Morphological observation; Fusarium solani; Phylogenetic tree; Screening

目    录

摘要 1

Abstract 1

引言 1

1 材料与方法 2

1.1 病原菌的采集分离与纯化 2

1.1.1 病原菌的采集 2

1.2 病原菌形态学观察 2

1.2.1 菌落形态的观察 2

1.2.2 菌丝、孢子性状观察 2

1.3 病原菌分子鉴定 2

1.3.1 病原菌 DNA 的提取 3

1.3.2 PCR扩增 3

1.3.3 测序及系统发育树分析 3

1.4 不同培养基对病原菌生长的影响 3

1.5 病原菌致病性检测 5

1.5.1 检测根腐病菌对不同植物的致病性 6

1.5.2 病原菌在不同培养基上的致病性检测 6

2. 结果与分析 6

2.1 病原菌采集及形态学观察结果 6

2.2 分子鉴定结果 7

2.2.1 PCR扩增结果 7

2.2.2 测序及构建系统发育树结果 7

2.3 不同培养基培养结果 8

2.4 致病力检测结果 9

2.4.1 PDA培养基培养的病原菌致病力检测 9

2.4.2 不同培养基培养的病原菌致病力检测 10

3. 讨论 11

参考文献 13

致谢 15

番茄根腐病菌的分离鉴定、培养基的筛选以及致病力检测

引言

   番茄(Tomato)一年生或多年生草本植物，别名西红柿、洋柿子，古名六月柿、喜报三元。因其果实营养丰富[1]，具特殊风味，以及较高的药用价值[2]，一直被人们所喜爱。番茄可以生食、煮食、加工制成番茄酱[3]、番茄汁[4]或者整果罐藏做成罐头。番茄是全世界栽培最为普遍的果菜之一，在我国有广泛的种植面积。同时番茄也是一种重要的模式植物[5]，用以研究灰霉病[6~7]、白粉病[8]、晚疫病[9~10]以及黄萎病菌[11]，在实验室中被广泛使用。然而，由辣椒疫霉和寄生疫霉引起的根腐病菌的侵害，导致番茄植株枯萎甚至死亡。产量大幅下降甚至绝收，给菜农带来大量经济损失[12]。本试验对周口地区番茄根腐病菌进行分离、纯化、培养以及鉴定，对番茄根腐病进行了初步的研究[13]。

1 材料与方法

1.1 病原菌的采集分离与纯化

1.1.1 病原菌的采集

本试验所用菌株来自采集的河南省周口地区田间患病的番茄植株。