在众多的研究中人们发现甜味蛋白是一个有多基因家族编码的蛋白质，人们发现它至少拥有5种蛋白产物[14-16]。这些蛋白产物都是只有一条直链多肽链组成的，一般情况下加热会使甜味蛋白发生变性从而失去甜味效果[17-19]。以前研究甜味蛋白仅仅是这个家族当中的部分成员，现在我们的目标是以模式植物为研究对象，把这个家族的所有成员研究一下，以确定出有哪些新的甜味蛋白。

1. 材料与方法

1.1 物种材料选取

本研究涉及到的物种材料分别是藻类植物、苔藓类植物、蕨类植物、裸子植物、单子叶植物和双子叶植物的代表物种。主要包括衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)、小立碗藓(Physcomitrella patens)、江南卷柏(Selaginella moellendorffii)、欧洲云杉(Picea abies)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)、大豆(Glycine max)、水稻(Oryza sativa)、高粱(Sorghum bicolor)。

1.2 甜味蛋白检索与序列下载

首先，直接在NCBI数据库中检索西非竹芋的(卡坦菲，Thaumatococcus daniellii)蛋白序列，以此蛋白序列作为种子序列，基于BLASTP同源搜索策略，在Plaza数据库中搜索其同源基因，分别下载衣藻、小立碗藓、江南卷柏、欧洲云杉、拟南芥、大豆、水稻和高粱的甜味蛋白同源物的核酸和蛋白序列，用于下面的研究。

1.3 序列比对与类甜味蛋白的聚类分析

以拟南芥和水稻等8种植物的甜味蛋白同源基因为研究对象，利用Clustal X工具[20]对这些序列进行比对，然后，将比对序列文件直接导入到MEGA软件中[21]，采用MEGA软件内置的邻接方法(NJ)构建系统进化树，进化树能将植物甜味蛋白类似基因聚成不同类群。

1.4 候选甜味蛋白预测及其保守区或活性位点的鉴定

根据植物类甜味蛋白的聚类结果，将与西非竹芋甜味蛋白聚为一个进化分支的甜味类似蛋白作为候选的甜味蛋白，进而认为这些候选甜味蛋白即为新型植物源甜味剂。为探索这些新型甜味剂的序列特征，利用CDD工具对这些候选蛋白的保守结构域进行预测，并结合已知的甜味蛋白预测其活性位点。