摘要:本实验采用分光光度法、凝胶电泳、高效液相色谱技术、常规ELISA等方法，对AcmNPVGP64中和抗体的含量，纯度，阴阳性鉴别，宿主蛋白残留量，蛋白A残留量，免疫活性等进行了一系列检测和质量评价。实验结果显示GP64抗体的检测浓度为1.53mg/mL，在凝胶电泳和SEC-HPLC实验中，得出其纯度分别为98.6%和95%，而设计的鉴别试验，鉴别结果为阳性，蛋白残留浓度为81.0ng/mL，残留总量为54.0ppm，蛋白A残留检测中蛋白A的含量为6.8ppm，对假病毒的抑制率为100%。以上实验结果确定了AcmNPVGP64中和抗体的质量，符合放行标准，可以放行，并在此基础上加以研究和评价，对其发展前景进行展望。

关键词:AcmNPV；GP64；中和抗体

Quality Evaluation and Prospects of AcmNPVGP64  Neutralizing Antibodies

Abstract：Content，purity，residues host proteins, A residual amount of protein，active immunity of GP64 neutralizing antibodies were conducted a series of detection by the method of spectrophotometry，gel electrophoresis，high performance liquid chromatography，conventional ELISA，and the quality of GP64 neutralizing antibodies was  evaluation .The results showed that the detection of antibodies to GP64 concentration 1.53mg/mL, and the SEC-HPLC gel electrophoresis experiments, the purity obtained were 98.6% and 95%, and the identification test, designed as positive discrimination result, the residual protein concentration 81.0ng/mL, the total residue in 54.0ppm, the content of protein a residues protein a is 6.8ppm, false-virus inhibition was 100%. These results determine the quality AcmNPVGP64 neutralizing antibodies, in line with the standard release, can be released, and to study and evaluate this basis, the prospect of its development prospects.

Keywords:AcmNPV;GP64;Neutralizing antibodies

目录

摘要 1

引言 2

1.实验材料及方法 2

1.1实验材料及仪器 2

1.1.1 实验材料 2

1.1.2实验试剂及药品 2

1.1.3实验仪器 3

1.2实验方法 3

1.2.1 GP64中和抗体含量检测 3

1.2.2 GP64抗体 SDS-PAGE凝胶电泳 4

1.2.3 GP64抗体纯度检测 5

1.2.4 GP64鉴别实验检测 5

1.2.5 GP64抗体宿主蛋白残留含量检测 6

1.2.6 GP64抗体中蛋白A的残留检测 6

1.2.7 GP64抗体免疫活性检测 6

2.结果与分析 8

2.1 GP64抗体含量检测结果 8

2.2GP64抗体 SDS-PAGE凝胶电泳结果 8

2.3 GP64抗体纯度检测结果 9

2.4 GP64鉴别实验检测结果 10

2.5 GP64宿主蛋白残留含量检测结果 11

2.6 GP64抗体中蛋白A的残留检测结果 11

2.7 GP64抗体免疫活性检测结果 11

3.讨论与结论 12

4.展望 13

参考文献 14

致谢 16

AcmNPVGP64中和抗体的质量评价研究及展望

引言

杆状病毒是一种双链环状DNA病毒，专门寄生在节肢动物体内，其中苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcmNPV)的研究最为广泛[1]。AcmNPV能够感染将近40种鳞翅目昆虫，感染宿主细胞后的病毒一般有两种表型，一种为包涵体病毒(ODV)，另一种为非包涵体病毒(BV)。迄今为止只在BV颗粒中发现GP64蛋白，分子量为64Kb[2]，相对分子质量为59300。在AcmNPV中，GP64 蛋白是构成非包涵体病毒(BV)的重要组成成分[3]，BV颗粒的一端是它主要集中的地方。GP64蛋白属于糖蛋白，含岩藻糖、甘露糖和N—乙酰葡糖胺等，这些糖都属于N—连接寡糖。它包含512个氨基酸残基，其中有位于胞外区的大的糖基化的N-末端、跨膜螺旋[4]。它主要以三聚体形式存在BV的一端，形成典型的膜粒结构[1]，在病毒感染早期和晚期都能表达。GP64蛋白属于第三类过滤性膜融合蛋白，是病毒进入宿主细胞的关键功能蛋白之一[5]，它作为杆状病毒BV上的囊膜蛋白，以内吞的方式进入细胞，在结合宿主细胞受体和调节低pH引发膜融合方面有重要作用，同时GP64蛋白也是病毒萌芽和后代繁殖所必需的物质[6-8]。中和抗体是抗病毒免疫的主要因素之一[9]，它既可以中和游离的病毒颗粒，又能作用于被病毒感染的细胞，从而发挥保护性的作用[10-11]。当病原微生物侵入机体时会产生相应的抗体，B淋巴细胞产生的某些抗体，可以与病原微生物表面的抗原结合，从而阻止该病原微生物黏附靶细胞受体，阻碍其侵入细胞。由此可以看出GP64中和抗体的重要性。因此，设计实验对中和抗体的质量进行研究评价。