Fluralaner作为一类新型异噁唑啉类杀虫剂，主要通过干扰GABA门控氯离子通道发挥作用。GABA是动物体内一种主要的抑制性神经递质，来源于非蛋白质，是一种重要的氨基酸，由谷氨酸脱羧酶控制合成，通过与GABA受体结合而发挥其生物学功能[8]。GABA受体作为杀虫剂作用的重要靶标之一，已日渐成为杀虫剂毒理机制研究的重点。同时，在防治德国小蠊的杀虫剂作用靶标中，与德国小蠊抗性相关的靶标多见于乙酰胆碱酯酶、神经轴突钠离子通道，而少见于GABA受体氯离子通道及保幼激素受体等[9]。在传统杀虫剂抗性普遍发生、高残留、高毒性等问题下，fluralaner的研发不仅丰富了杀虫剂品种，同时开创了一类全新的GABA门控氯离子通道干扰剂。Fluralaner杀虫谱广，对蜱目、蚤目、虱目、半翅目和双翅目等害虫均具有良好杀虫活性，同时，它与现有杀虫剂无显著交互抗性，对部分抗性害虫也具有较好杀虫活性[10]。本实验拟测定fluralaner对德国小蠊的毒力，比较fluralaner与常用杀虫剂的生物活性差异；并克隆分析fluralaner作用靶标即GABA受体，以研究其作用机理。该研究将对解决德国小蠊抗药性问题具有一定的指导性意义。

第一章Fluralaner及常用药剂对德国小蠊的室内毒力测定

1 材料与方法

1.1供试虫源

室内饲养德国小蠊品系，由本实验室提供，在未接触任何杀虫剂的条件下用人工饲料连续饲养至今。

   饲养方法：在室内饲养缸中以不分龄期的方式混合饲养，饲养缸口内下涂3-5cm宽的凡士林油带，以防逃逸。饲养缸内放置两个培养皿，一个培养皿用于盛放混合饲料（面粉：奶粉：葡萄糖比例为6:3:1混合），另一个培养皿用于盛放含水棉花，每3-4天补充饲料和水。分离缸底部放入多层折叠硬纸板，作为德国小蠊的栖息场所；饲养缸用单层纱布封住，以防逃逸。定期打扫饲养缸，保持洁净的饲养环境。适时观察德国小蠊的密度，0.6-1.0只/cm2为宜，既保证虫体的正常发育，又充分利用饲养缸饲养最大量的试虫，当密度高于该范围时，应分缸饲养。养殖条件为温度(26±1)℃,湿度(60±5)%，光照条件（L:D为16:8h）[11]。

1.2主要试剂及设备

1.2.1主要杀虫剂及辅助试剂名称

杀虫剂（Insecticides） 含量（Percent） 来源（Source）

Fluralaner >99% 本实验室存放

氟虫腈 92% 本实验室存放

丁烯氟虫腈 92% 本实验室存放

敌敌畏 93% 本实验室存放

高效氯氰菊酯 96% 红太阳公司，中国

残杀威 >99% 阿拉丁公司，中国

辅助试剂：丙酮、95%胡椒基丁醚（购自阿拉丁公司）。

1.2.2主要设备与材料

   手动微量点滴器（购自Burkard公司），加湿器，一次性塑料杯，橡皮筋，棉花，凡士林，培养皿，面粉，奶粉，葡萄糖，方形塑料缸等。

1.3 药物配制

1.3.1 Fluralaner对德国小蠊的室内毒力测定

　　以丙酮为溶剂配制一定浓度的fluralaner母液，再用丙酮稀释至1.25mg/L、2.5mg/L、5.0mg/L、7.5mg/L、10.0mg/L、12.5mg/L六个浓度梯度。

1.3.2常用药剂对德国小蠊的室内毒力测定

   以丙酮为溶剂配制一定浓度的fluralaner、氟虫腈、丁烯氟虫腈、敌敌畏、高效氯氰菊酯、残杀威母液，再用丙酮将各药剂分别稀释至5.0mg/L。

1.3.3 Fluralaner与增效剂胡椒基丁醚对德国小蠊的室内毒力测定

   用少量丙酮将各增效剂溶解后，将胡椒基丁醚稀释至100.0μg/μL。毒力测定用点滴法进行两次点滴。先用1.0μL增效剂点滴供试昆虫，1h后，再用不同浓度（1.25mg/L、2.5mg/L、5.0mg/L、7.5mg/L、10.0mg/L、12.5mg/L）fluralaner点滴供试昆虫[12]。