1 材料和培养基的准备及研究方法

1.1 材料

W38烟草种子和组培苗由实验室保存和养护。

1.2 材料的选择和培养基的准备

1.2.1 无菌苗的获得

选择颗粒饱满，种皮完整的W38种子，经70 %的乙醇和3.0 %的次氯酸钠溶液消毒后播种在1/2MS培养基上，4-5 d后就可以得到组培苗。也可以直接对组培苗进行无菌扩繁。

1.2.2 FELB诱导培养基的准备

在MS基础培养基上，加入不同浓度梯度的植物生长素NAA与2,4-D（0 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、15 mg/L和20 mg/L）。然后，加入3 %的蔗糖，调整pH至5.8-6.06，最后加入0.7-0.8 %的琼脂粉。（NAA与2,4-D需要现用现配）

1.2.3 FELB再生培养基的准备

再生培养基的配置是在MS培养基中添加1.0 mg/L 6-BA，加入30 g/L蔗糖调节pH至5.8-6.06，最后加入0.7-0.8 %琼脂粉。以上的培养基需要在湿热灭菌，灭菌的条件为（0.15 kPa，121℃），时间为18 min。

1.3 研究方法

1.3.1 材料的培养

选择籽粒饱满，表皮完整的烟草W38种子，在超净工作台中用75 %的乙醇进行表面消毒1 min，然后用3.0 %的次氯酸钠溶液消毒9 min，无菌水冲洗4次后，在无菌滤纸上吸去种子上的水分[10]。用灭过菌的牙签将种子播种于1/2MS固体培养基上，置于光下培养。或者在超净工作台中，用灭过菌的镊子或者手术刀将带有腋芽的W38茎插在MS固体培养基上，光照培养。

1.3.2 诱导组织的处理

取烟草W38无菌苗的根、茎和叶于无菌水中。将根和茎（无腋芽）切至1 cm左右，叶片切至1 cm×1 cm左右，放在无菌的滤纸上吸干水分。

1.3.3 FELB的诱导

将上述的根、茎和叶分别放在FELB诱导培养基上。在黑暗，25℃的条件进行FELB的诱导，大约1周后，在添加2,4-D的MS培养基上的外植体出现粘稠、透明的液态愈伤组织[11-15]，10 d后在愈伤中形成了白色的类蛙卵状体细胞胚状结构。而添加NAA的MS培养基未能诱导出FELB结构。